免疫蛍光法（Immunofluorescenceと免疫組織化学の違い

分子生物学的手法を用いた疾病診断は、臨床検査技術の新たな分野として注目されています。生物内のDNA、RNA、発現タンパク質を分析することにより、病気を特定し、病気の原因を理解するために用いられるすべての検査と方法が含まれます。分子診断技術の急速な発展により、感染症や非感染症に関する基礎研究が可能になった。疾患と関連する主要な遺伝子やタンパク質の配列または発現レベルの変化を同定するために使用されます。免疫蛍光法（IF）と免疫組織化学法（IHC）は、腫瘍生物学において最も広く用いられている技術です。IFは蛍光分析法を用いてモノクローナル抗体とポリクローナル抗体を分析するIHCであり、IHCは化学的アプローチによりモノクローナル抗体とポリクローナル抗体を検出するものです。これがIFとIHCの大きな違いです。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. 免疫蛍光法とは 3. 免疫組織化学法とは 4. 免疫蛍光法と免疫組織化学法の類似点 5. 横並び比較-免疫蛍光法と免疫組織化学法の表形式 6. まとめ

免疫蛍光法（if）は何ですか？

免疫蛍光法は、アッセイに使用する抗体を蛍光色素や蛍光タンパク質で標識した検出技術である。標識された二次抗体は不要なバックグラウンドシグナルを発生させるため、現在のIF技術ではアッセイ中の不要なシグナルを避けるために、一次抗体自体を標識することが基本となっています。この手法では、一次抗体と二次抗体の非特異的**結合が防止され、二次インキュベーションの工程がないため、より迅速な対応が可能です。また、データの品質も向上しています。

Fig.01：BrdU、NeuN、GFAPの二重免疫蛍光染色

フルオロクロムまたはフルオロクロムは、放射線、好ましくは励起紫外線を吸収することができる化合物である。粒子が励起状態から基底状態に到達すると、その際に放出される放射線が検出器に捕捉・検出され、スペクトルが作成される。蛍光標識は、特定の反応の適合性と安定性のために非常に重要であり、正確な結果を得るためには、抗体と正しく結合する必要があります。蛍光色素としては、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）がよく使われるが、これは緑色で、吸収と発光のピーク波長はそれぞれ490 nmと520 nmである。また、ローダミンは赤色で、吸収と発光のピーク波長がそれぞれ553 nmと627 nmであり、IFに用いられる試薬の一つである。

免疫組織化学（ihc)は何ですか？

IHCは、標的細胞における抗原の存在を同定・確認するために用いられる分子アッセイである。iHCでは、モノクローナル抗体やポリクローナル抗体を用いて、標的細胞表面上の抗原の存在を確認する。この技術は、抗原と抗体の結合を利用したものです。検出マーカーはこれらの抗体と結合し、特定の抗原の有無を検出する。これらのマーカーは、酵素などの化学的マーカー、蛍光標識抗体、放射性標識抗体のいずれでもよい。

図02：マウス脳切片の免疫組織化学染色

IHCの最もポピュラーな用途は、悪性腫瘍の存在を確認するがん細胞生物学ですが、感染症の検出にも利用されています。

免疫蛍光法（Immunofluorescenceと免疫組織化学の共通点

• 免疫蛍光法および免疫組織化学法は、in vitroの条件下で行われます。
• いずれの手法も抗原抗体によるものである
• どちらも非常に高速な技術です。
• これらの技術による結果は再現可能です。
• どちらもデータの質を向上させました。
• これらの技術は、がんや感染症などの診断に利用されています。

免疫蛍光法（Immunofluorescenceと免疫組織化学の違い

概要 - 免疫蛍光法（Immunofluorescence vs. 免疫組織化学

分子機構は、医学の分野に多くの変化をもたらし、診断の分野に革命をもたらす高度な分子検査を生み出しました。これらの発明により、疾病の迅速かつ正確な特定と確認が可能となり、薬剤の投与や生産がうまくいくようになった。IFは蛍光の原理で抗原を検出し、IHCは化学結合の原理で抗原を検出する、抗原と抗体の結合という概念に基づいた診断法である。これがIFとIHCの違いです。

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引用

1 Aoki, Valeria et al."直接・間接免疫蛍光法"Anais Brasileiros de Destromogia, SociedadeBrasileira de Destromogia, available here. accessed 25 Aug. 2017. 2 Durayan, Jeyapradha et al."Applications of Immunohistochemistry," Journal of Pharmacy and Biochemistry, Medknow Publicati*** & Media Pvt Ltd, August 2012, available here. 2017年8月25日アクセス 2 Durayan, Jeyapradha et al.免疫組織化学の応用」、『薬学と生化学』、Medknow Publicati***&Media Pvt Ltd、2012年8月。