せんしょくたいほこうとジャンピングの違い

染色体ウォーキングと染色体スキップは、分子生物学において遺伝子を染色体上に局在させ、ゲノムを物理的に局在させるために用いられる技術的なツールです。クロモゾームウォーキングは、ゲノムライブラリーの中から隣接するクローンを分離してクローニングすることを繰り返し、目的遺伝子をクローニングする技術である。染色体スキップは、染色体歩行のブレークポイントを克服した特殊な形態である。染色体ウォーキングでは、長さの短い染色体の配列とマッピングしかできませんが、染色体スキップでは、ほとんどの染色体の配列を決定することができます。これが、染色体ウォーキングと染色体ジャンピングの決定的な違いです。

目次1. 概要と主な違い2. 染色体ウォーキングとは3. 染色体ジャンプとは4. 横から見た比較 - 染色体ウォーキングとジャンプ5. まとめ

クロモゾームウォーキングは何ですか？

クロモゾームウォーキングは、重なり合った制限断片を用いて染色体の未知配列領域を探索するツールである。染色体ウォークでは、既知の遺伝子の一部をプローブとして使用し、マッピングまたは配列決定される染色体の全長を記述して行きます。マーカーから目標の長さまで染色体ウォークでは、オーバーラップする各断片の末端をハイブリダイゼーションに用いて次の配列を同定する。

プローブはクローン化されたDN**セグメントから調製され、サブクローニングされる。そして、次のオーバーラップするセグメントを見つけるために使用される。これらの重複配列はすべて、染色体の遺伝子地図を構築し、標的遺伝子の位置を特定するために使用される。組換えゲノムライブラリに含まれる断片を重ね合わせて長いDNA断片を解析する方法です。

クロモゾームウォーキング技術 - ステップ

1. 既知の遺伝子やマーカーを含むDN**セグメントの単離
2. 選択したフラグメントの制限プロファイルの作成、およびプローブとして使用するためのフラグメント末端のサブクローニング
3. 次のオーバーラップフラグメントとプローブのハイブリダイゼーション
4. フラグメント1の制限地図を作成し、フラグメント1の末端領域をサブクローン化し、次のオーバーラップするフラグメントを同定するためのプローブとして使用した。
5. 次のオーバーラップフラグメントとプローブのハイブリダイゼーション 2
6. フラグメント2の制限地図の作成と、次のオーバーラップフラグメントを同定するためのプローブとしてフラグメント2の末端をサブクローニングする。

上記の手順は、標的遺伝子または配列の全長の3'末端まで続ける必要がある。

図01：クロモゾームウォーキング技術

染色体ウォーキングは、多くの生物のsnpの発見、遺伝性疾患の解析、関連遺伝子の変異の発見を可能にする細胞遺伝学の重要な側面である。

クロモゾームジャンピングは何ですか？

染色体スキップは、生物学的な染色体の局在を確認するために用いられる物理的な技術です。この技術は、クローニングの際に重複したDNA領域を発見した際に生じる染色体ウォーキングの障害を克服するために考案されたものである。したがって、染色体スキップ技術は、染色体ウォーキングの特殊な形態と見なすことができます。染色体ウォーキングとは異なり、染色体ウォーキングではクローニングが困難な反復配列のDNAを迂回することができるため、迅速な対応が可能です。クロモソームスキッピングは、標的遺伝子と既知のゲノムマッピングマーカーとの間のギャップを縮める。

染色体スキップツールは、まず特殊な制限酵素で特定のDNAを切断し、その断片を環状のループに結紮する。その後、配列設計が既知のプライマーを用いてループの塩基配列を決定する。このプライマーは、別の方法でジャンプとシークエンスが可能です。その結果、繰り返しの多いDNA配列を迂回して、染色体内を素早く移動し、標的遺伝子を探し出すことができるのです。

嚢胞性線維症疾患の遺伝暗号の発見は、染色体ジャンプツールで達成された。染色体ジャンプとウォーキングを組み合わせることで、ゲノムマッピングのプロセスを強化することができます。

図02：クロモジーのジャンプ

せんしょくたいほこうとジャンピングの違い

概要 - せんしょくたいほこう vs. ジャンピング

クロモゾームウォーキングは、染色体上の既にクローニングされた遺伝子の近くに特定の遺伝子が存在することが分かっており、ゲノムライブラリから隣接するゲノムクローンを繰り返し単離することで同定できる場合によく適用される方法である。しかし、染色体ウォーキングの手法で重複したDNA領域が見つかると、このプロセスを継続することができなくなります。そこで、これを打破するのがこの技術です。染色体スキップは、この制限を克服する分子生物学的手段である。クローニングが困難なこれらの反復性DNA領域を迂回し、ゲノムの物理的な局在を確認するのに役立つのです。歩くこととジャンプすることの大きな違いは、染色体ジャンプです。