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リボヌクレアーゼは、RNAをより小さな単位に特異的に**分解するヌクレアーゼである。エンドモルフィナーゼとエクトリボヌクレアーゼの2つのグループに分けられる。エンドリボヌクレアーゼは、一本または二本鎖のRNAを分解する核酸エンドヌクレアーゼである。RNAポリヌクレオチド鎖のホスホジエステル結合を切断する。例えば、RNase A、RNase III、RNase T1、RNase P、RNase Hなどが挙げられる。エクソヌクレアーゼは、RNA分子の5'末端または3'末端から末端ヌクレオチドを除去することによりRNAを分解する核酸エクソヌクレアーゼのことをいう。RNase AとRNase Hの重要な違いは、RNase Aがトリプシン型リボヌクレアーゼで、一本鎖のRNAをより小さな成分に特異的に**分解するのに対し、RNase Hは非特異的**な酵素で、RNA-DNAハイブリッド中のRNAが加水分解メカニズムでをより小さなユニットに切断する。
1. 概要と主な相違点 2. リボヌクレアーゼAとは 3. RNASE Hとは 4. RNASE AとRNASE Hの類似点 5. 並べて比較 - RNASE AとRNASE Hのテーブル形式 6. まとめ
RNase Aは膵臓のリボヌクレアーゼで、一本鎖RNAの3'末端の対になっていないシトシン残基とウラシル残基を特異的に**切断する。 RNase Hは高塩濃度 (0.3 M以上のNaCl濃度)で作用する。加水分解反応は2つのステップで行われる。2',3'環状リン酸中間体を経て3'リン酸化物を形成する。高い塩濃度では一本鎖RNAに特異的**であるが、低いNaCl濃度(0.3M NaCl以下)では二本鎖RNAやRNA-DNAハイブリッド中のRNAも分解することが可能である。
ブルース・メリフィールドが初めて合成した酵素。リボヌクレアーゼAは、分子生物学研究において非常によく知られた酵素である。ウシ膵臓リボヌクレアーゼAは、実験室で使用される最も硬い酵素の一つであるリボヌクレアーゼAの例である。この酵素は、その活性に補酵素を必要としない。rnaseaは最初の酵素であり、正しいアミノ酸配列が検出された3番目のタンパク質である。この酵素はアミノ酸数124、分子量12,600daと非常に小さく、4つのヒスチジン残基(his12とhis119、触媒反応に関与)を持っています。
図01:RNase A
粗リボヌクレアーゼは煮沸により分離することができる。煮沸すると、他のすべての酵素が残ったリボヌクレアーゼAを分解してしまうのです。この酵素はリボヌクレアーゼ阻害タンパク質、重金属、バナジン酸ウリジン錯体で阻害される。
リボヌクレアーゼHは、RNAを加水分解する非特異的**リボヌクレアーゼであり、RNA-DNAハイブリッド中のRNAの3'-O-P結合を切断する。最終的には3'OH末端と5'リン酸末端の生成物を生成する。新しいDNA鎖が形成されるときにRNAプライマーを除去することで、DNA複製に重要な役割を果たす。実験室条件下では、RNA-DNAハイブリダイゼーション***において、RNAは分解するがDNAや未ハイブリダイゼーションRNAは分解しない。 この酵素は通常、cDNA合成において最初の相補的DNA鎖の形成後にRNAテンプレートを破壊するために使用される。
図02:RNase H
RNase Hは、ヌクレアーゼ保護解析にも使用されます。RNase Hは、細胞内外のノンコーディングRNAを破壊する能力を有している。このタンパク質の活性には、補酵素として金属イオンが必要である。RNase Hの酵素を阻害するためにキレート剤(EDTA)を使用することができます。
リボヌクレアーゼA、リボヌクレアーゼH | |
リボヌクレアーゼAは膵臓のリボヌクレアーゼで、塩濃度が高いと一本鎖RNAの対になっていないシトシンおよびウラシル残基の3′末端を特異的に切断することができる。 | リボヌクレアーゼHは、非特異的**なリボヌクレアーゼで、加水分解反応によりRNAを分解する。 |
RNA切断の性質 | |
リボヌクレアーゼAは、高塩濃度において一本鎖RNAを特異的に**切断する。 | RNAase Hは、RNA-DNAハイブリダイゼーションにおいて、RNAを切断する。 |
活動に必要な共通要素 | |
RNase Aの活性に補酵素は必要ない。 | rnasehの活性には、補酵素として金属イオンが必要である。 |
タンパク質活性阻害剤 | |
リボヌクレアーゼ阻害タンパク質、重金属およびバナジン酸ウリジン錯体によるリボヌクレアーゼA活性の阻害。 | キレート剤(EDTA)はRNase Hの活性を阻害する。 |
DNA複製におけるRNAプライマーの除去 | |
RNAase Aは、DNA複製におけるRNAプライマーの除去には使用されない。 | DNA複製におけるRNAプライマー除去のためのRNAase H |
相補的DNA(C-DNA)合成におけるDNA鋳型の除去 | |
RNase Aは、相補的DNA(C-DNA)合成の際のRNA鋳型の除去には使用されない。 | RNase Hは、相補的DNA(C-DNA)合成の際にRNA鋳型の除去に使用される。 |
オリゴヌクレオチド(dt)ハイブリッド化mRNAからのPoly-A-Tailの除去 | |
RNase Aは、オリゴヌクレオチド(dt)ハイブリダイゼーションしたmRNAから「ポリAテール」を除去するためには使用されない。 | オリゴヌクレオチド(dt)ハイブリダイゼーションしたmRNAから「ポリAテール」を除去するためのRNase H |
リボヌクレアーゼは、RNAをより小さな単位に切断することができるヌクレアーゼである。エンドリボヌクレアーゼとエキソリボヌクレアーゼの2種類がある。エンドリボヌクレアーゼは、一本鎖または二本鎖のRNAを分解することができる核酸エンドヌクレアーゼである。RNAポリヌクレオチド鎖のホスホジエステル結合を切断する。リボヌクレアーゼAとリボヌクレアーゼHは2つのエンドモルフィナーゼである。リボヌクレアーゼAは膵臓のリボヌクレアーゼで、塩濃度が高いと一本鎖RNAの3'末端の対になっていないシトシン残基とウラシル残基を特異的に**切断する。リボヌクレアーゼHは非特異的**なリボヌクレアーゼで、加水分解反応によりRNAを分解する。ここがRNase AとRNase Hの違いである。
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1.カロツリ、作家アムラーサ。"17 RNase Aに関する事実を知る必要がある"AGブログ、2017年2月22日。URL 2. "リボヌクレアーゼ", ウィキペディア, ウィキメディア財団, 2018年1月5日.こちらから入手可能 2. "リボヌクレアーゼ", ウィキメディア財団ウィキペディア, 2018年1月5日.