ショ糖勾配超遠心法とショ糖緩衝超遠心法の大きな違いは、ショ糖勾配超遠心法では連続したショ糖勾配を用いるのに対して、ショ糖緩衝超遠心法では不連続のショ糖勾配を用いることです。

ショ糖勾配法とショ糖緩衝超遠心法は、特定の種類の高分子を分離するための類似した技術である。どちらの手法でも、スクロース密度勾配が使用されます。ただし、ショ糖勾配超遠心法では連続密度勾配、ショ糖緩衝超遠心法では不連続密度勾配を用います。

カタログ

1. 概要と主な相違点 2. ショ糖勾配超遠心法とは 3. ショ糖緩衝超遠心法とは 4. ショ糖勾配超遠心法とショ糖緩衝超遠心法の類似点 5. 並べて比較 - ショ糖勾配 vs. ショ糖緩衝超遠心法 表形式 6. まとめ

スクロースグラジエント超遠心分離法は何ですか？

ショ糖勾配超遠心法は、DNA、RNA、タンパク質などの大きな分子を分離することができる技術です。この手法にはいくつかの段階があります。スクロースグラジエントの調製、遠心分離、分離、溶出である。このステップでは、グラデーションが重要なテクニックとなります。スクロースグラジエントカラムの表面に、サイズの異なる高分子を含む試料を重ねる手法である。遠心分離の際、サイズの異なる高分子はショ糖勾配カラムを通して異なる速度で沈殿する。沈降は、遠心力、高分子の大きさ形状、密度、勾配の密度、粘性などのいくつかの要因に依存する。遠心分離の最後には、高分子が密度によって空間的に分離されます。より大きな高分子（高密度高分子）は、底に向かって沈殿する。軽い（密度の低い）高分子はグラデーションの上部にとどまる。その結果、分子は異なるバンドに分離される。これらのバンドを分離し、スクロースから特定の高分子を分離する。

図01：ショ糖勾配超遠心法

応用面では、DNA分子の分離に広く利用されている。スクロース勾配超遠心法は、タンパク質複合体のサイズと組成を特徴付けるために一般的に使用されています。また、mRNAの部分精製にも利用することができます。

スクロースクッション超遠心分離法は何ですか？

スクロースバッファー超遠心法も大きな分子の分離を可能にする手法の一つです。ショ糖密度勾配超遠心法とは異なり、ショ糖緩衝超遠心法では不連続な密度勾配を用います。ショ糖の濃度は上から下に向かって高くなります。この手法では、清澄化した抽出液を遠心管に入れた少量のショ糖溶液（いわゆるショ糖緩衝液）に入れることで分離が行われる。これにより、高速遠心分離機での分離が良好になります。スクロースバッファーパッドの間で分子がバンド状に分離するため、白いバンドを集めて精製することができる。また、スクロースバッファー法により、さらに不純物を除去することも可能です。スクロースバッファー法では、チューブの60～70％が試料で満たされる。そのため、スクロースバッファー法は、より大量のサンプルを扱うことが可能です。

スクロースグラジエント遠心分離法とスクロースクッション超遠心法の共通点

• 高分子の混合物を分離する方法として、ショ糖勾配法とショ糖緩衝液超遠心法がある。
• どちらの方法でも、ショ糖勾配が使用されます。
• 遠心分離は、どちらの方法にも含まれるステップです。
• いずれの方法も、分子を帯状に析出させる。

スクロースグラジエント遠心分離法とスクロースクッション超遠心法の違い

ショ糖勾配超遠心法は、遠心管内で連続的にショ糖勾配を用いる手法であり、ショ糖緩衝超遠心法は、不連続的にショ糖勾配を用いる手法である。したがって、この点がスクロースグラジエント法とスクロースバッファー超遠心法の重要な違いである。

また、ショ糖緩衝超遠心法では大量の試料を処理できますが、ショ糖勾配超遠心法では比較的少量の試料を処理することができます。

ショ糖勾配法とショ糖緩衝液超遠心法の違いについて、より詳しく下表にまとめました。

概要 - スクロースグラジエント遠心分離法 vs. スクロースクッション超遠心法

ショ糖勾配超遠心法は、連続したショ糖勾配を用いて高分子を分離する方法です。一方、ショ糖緩衝超遠心法は、不連続なショ糖勾配を用いて、ある種の粒子の混合物を分離するものです。したがって、この点がスクロースグラジエント法とスクロースバッファー超遠心法の重要な違いである。ショ糖緩衝液法は、分子を試験管の底に押し付けるショ糖勾配超遠心法とは異なり、機械的ストレスを与えないため、形態的に無傷の粒子を収集することができます。また、ショ糖緩衝超遠心法は、ショ糖勾配超遠心法よりも大容量の試料を扱うことができます。

引用

1Dijkstra, Jeanne, and Cees P. de Jager. "Density Gradient Centrifugation", Springer, Berlin, Heidelberg, 1 January 1998, hereから入手可能です。