RP-HPLCとHICの主な違いは、RP-HPLCはより極性の高い移動相とより極性の低い固定相を使用することです。しかし、HICは疎水性の固定相を使用しているため、疎水性の分子はHICに付着することができます。

クロマトグラフィーは、混合物をその成分に分離するのに役立つ分析技術である。まず、分離したい試料を溶液に溶かす必要がある。この溶液と物質の混合物を移動相と呼びます。移動相は、次に固定相と呼ばれる別の物質に通される。固定相は成分の分離を決定する。移動相と固定相の間で物質が分配されることにより、分離が行われます。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. RP-HPLCとは 3. HICとは 4. 横並び比較 - RP HPLCとHICの表形式 5. まとめ

逆相高速液体クロマトグラフィー(RP HPLC)は何ですか？

RP-HPLCとは、Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography（逆相高速液体クロマトグラフィー）の略称です。これは、混合物中の成分を疎水性に基づいて分離するものである。移動相の疎水性成分は固定相に固定化された疎水性リガンドに結合し、親水性成分は固定相表面に吸着することなく固定相を通過して溶出します。

図01：HPLCユニット

この方法は、他のクロマトグラフィー技術と比べて再現性が高く、応用範囲が広い。その結果、研究室ではHPLCの75％以上にこのメソッドを使用しています。多くの場合、水と混和性のある極性有機溶媒の水性混合物を移動相として使用します。そのため、溶液中の疎水性成分を固定相の表面に確実に付着させることができる。

ヒック社は何ですか？

HICとは、Hydrophobic Interaction Chromatography（疎水性相互作用クロマトグラフィー）の略です。逆相高速液体クロマトグラフィー法であり、主にタンパク質などの生体高分子の分離に使用される。この方法では、生体分子の試料に水性媒体**を使用する必要があります。これは、有機溶媒がタンパク質の変性を引き起こす可能性があるためです。また、この技術は、高分子とわずかに疎水性の固定相表面との相互作用を利用するものである。また、タンパク質の保持を促すため、サンプルに高濃度の塩を使用する必要があります（塩析）。塩濃度を徐々に下げていくことで、生体高分子を疎水性に応じて分離して溶出させることができる。

一般的には、イオン交換クロマトグラフィーと逆の条件で行う方法です。この手法では、まず試料中の溶質の溶媒化を抑えるために、緩衝液をカラムに通す必要がある。タンパク質の疎水性領域がむき出しになるのです。しかし、分子がより疎水的である場合、結合を促進するために必要な塩の量は少なくなる。ここでは、疎水性の低い溶質が最初に溶出し、塩濃度に応じて疎水性の高い溶質が最後に溶出する。

逆相高速液体クロマトグラフィー(RP HPLC)と株式会社ヒックの違い

RP-HPLCとHICの主な違いは、RP-HPLCは極性の低い固定相ではなく、極性の高い移動相を使用するのに対し、HICは疎水性の固定相を使用し、疎水性分子が付着することができる点です。

以下のインフォグラフィックは、RP-HPLCとHICの違いをまとめたものです。

概要 - 逆相高速液体クロマトグラフィー(RP HPLC) vs. 株式会社ヒック

RP-HPLCとHICの主な違いは、RP-HPLCが極性の高い移動相と極性の低い固定相を用いるのに対し、HICは疎水性の固定相を用い、疎水性の分子がそれに付着することを可能にすることです。

引用

1 "High Performance Liquid Chromatography Separation Mode", Waters, available here.