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DNA、RNA、タンパク質の特定の配列を検出することは、分子生物学におけるさまざまな研究に不可欠である。ゲル電気泳動は、DNA、RNA、タンパク質をその大きさに応じて分離する技術です。ゲルプロファイルから、特定のDNA配列、RNA配列、またはタンパク質が、ブロッティングや標識プローブとのハイブリダイゼーションと呼ばれる特殊な技術によって検出されます。ブロッティング法には、サザン法、ノーザン法、ウェスタン法の3種類があります。ノーザンブロッティングとウェスタンブロッティングの主な違いは、試料から検出する分子の種類です。サザンブロッティングはDNA試料から特定のDNA配列を検出する方法です。ノーザンブロッティングはRNA試料から特定のRNA配列を検出する方法です。ウェスタンブロッティングは特定のウェスタンブロッティングは、タンパク質試料から特定のタンパク質を検出する方法です。
Contents1. 概要と主な違い2. 南部シミとは。北方染色とは 4.免疫染色とは 5.並べて比較 - 北方染色 vs. 南方染色 vs. 西方染色 6.まとめ
サザンブロッティング法は、DNAサンプルから特定のDNA配列を同定するために、1975年にE.M. Southernによって開発されました。分子生物学に初めて導入されたブロッティング技術である。DNA中の特定の遺伝子や、DNA中の特定の断片などを検出することができます。詳細は以下の通りです。
サザンブロッティングは、分子生物学のさまざまな場面で利用されています。RFLP局在化、法医学研究、遺伝子発現におけるDNAメチル化、遺伝性疾患における変異遺伝子の検出、DNAフィンガープリントなどに有用である。
図01:サザンブロッティング技術
ノーザンブロッティングは、遺伝子発現を調べるために、試料から特定のRNA配列またはmRNA配列を検出する方法です。この技術は、1979年にAlwine、Kemp、Starkによって開発された。SouthernやWestern blottingの手法とは、いくつかのステップを経ているため異なります。しかし、この技術は、ゲル電気泳動、ブロッティング、特異的なマーカー・プローブとのハイブリダイゼーション、検出によっても実現できる。ノーザンブロッティング技術について以下に述べる。
ノーザンハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーションしたmRNAの検出と定量化、RNA分解の研究、RNA半減期の評価、RNAスプライシングの検出、遺伝子発現の研究などに重要なツールである。
図02:ノーザンブロッティング法
イムノブロット法とは、標識抗体を用いて、タンパク質混合物から特定のタンパク質を検出する方法である。したがって、ウェスタンブロットはイムノブロットとも呼ばれています。この技術は1979年にTowbinらによって紹介され、現在では研究室で日常のタンパク質分析に使用されている。手順は以下の通りです。
ウエスタンブロットは、ヒト血清サンプル中の抗HIV抗体の検出に使用されます。ウエスタンブロットはまた、B型肝炎感染の確認検査や狂牛病の確認検査としても使用されます。
図03:イムノブロット
北対南対西の打刻方法 | |
検出された分子の種類 | |
ノーザンブロッティング法 | ノーザンハイブリダイゼーションは、RNA試料から特定のRNA配列を検出するものです。 |
サザンブロッティング法 | サザンハイブリダイゼーションは、DNAサンプルに含まれる特定のDNA配列を検出するものです。 |
イムノブロット | ウェスタンブロッティングは、タンパク質試料から特定のタンパク質を検出する方法です。 |
ゲルタイプ | |
ノーザンブロッティング法 | アガロース/ホルムアルデヒドゲルを使用する。 |
サザンブロッティング法 | これはアガロースゲルを使って行われます。 |
イムノブロット | これはポリアクリルアミドゲルを使ったものです。 |
インプリント方式 | |
ノーザンブロッティング法 | これが毛細管現象です。 |
サザンブロッティング法 | これが毛細管現象です。 |
イムノブロット | これは力の伝達です。 |
使用プローブ | |
ノーザンブロッティング法 | 放射性または非放射性のcDNAまたはRNAプローブを標識したもの。 |
サザンブロッティング法 | DNAプローブには、放射性、非放射性というラベルが貼られています。 |
イムノブロット | 一次抗体はプローブとして使用されます。 |
検出システム | |
ノーザンブロッティング法 | これは、オートラジオグラフィー(光や色の変化を検出する方法)を用いて行われます。 |
サザンブロッティング法 | これは、光や色の変化を検出するオートラジオグラフィーを用いて行われます。 |
イムノブロット | これは、光や色の変化を検知することで行われます。 |
ブロッティングは、試料から特定のDNA、RNAまたはタンパク質を同定するための特殊な技術である。ノーザンブロッティングはRNA混合物から特定のRNA配列を検出する手法、サザンブロッティングはDNA試料から特定のDNA配列を検出する手法、ウェスタンブロッティングはタンパク質混合物から特定のタンパク質を同定する手法です。プロテインを使用しています。
参考文献1 Gibbons, Jenny."Immunoblotting: an overview of protein transfer", North American Journal of Medical Sciences. mednow Publicati*** & Media Pvt Ltd, March 2014.Web. 27 March 2017. Brown, T. "Southern Blotting", Latest Research Protocols in Immunology. u, US National Library of Medicine, May 2001.Web. 2017.3.27.He, Shan L. "Northern Blotting," Enzymatic Methods. u, U, National Library of Medicine, 2013.Web. 2017年3月27日