主要區別-北方與南方與西方印跡法
檢測DNA、RNA和蛋白質的特定序列對於分子生物學的各種類型的研究是必不可少的。凝膠電泳是一種根據DNA、RNA和蛋白質的大小進行分離的技術。從凝膠圖譜中，特定的DNA序列、RNA序列或蛋白質是通過被稱為印跡和帶標記探針雜交的特殊技術來檢測的。有三種不同類型的印跡方法，即南方，北方和西方。南北印跡法和西方印跡法的主要區別在於它從樣本中檢測到的分子類型。Southern印跡法是一種從DNA樣本中檢測特定DNA序列的方法。Northern印跡法是一種從RNA樣本中檢測特定RNA序列的技術。Western blotting是一種從蛋白質樣本中檢測特定蛋白質的方法。
內容1。概述和主要區別2。什麼是南方汙點。什麼是北方汙漬4。什麼是免疫印跡5。並列比較-北方與南方與西方印跡6。摘要
什麼是南方印跡法(southern blotting)？
Southern印跡技術是由E.M.Southern於1975年開發的，用於從DNA樣本中鑑定特定的DNA序列。這是第一個在分子生物學中引入的印跡技術。它可以檢測DNA中的特定基因、DNA中的特定片段等。具體如下。
- 從樣品中分離出DNA，用限制性內切酶消化。
- 用瓊脂糖凝膠電泳分離樣品。
- 用鹼性溶液將凝膠中的DN**段變性成單鏈。
- 單鏈DNA通過毛細管轉移到硝化纖維濾膜上。
- 轉移的DNA被永久固定在膜上。
- 膜上的固定DNA與標記探針雜交。
- 未結合的DNA通過洗滌從膜上洗掉。
- X射線膠片暴露在薄膜上，並製備放射自顯影。
Southern印跡法應用於分子生物學的不同方面。它在RFLP定位、法醫學研究、基因表達中的DNA甲基化、遺傳疾病中突變基因的檢測、DNA指紋圖譜等方面都很有用。
圖01：南方印跡技術
什麼是北方印跡法(northern blotting)？
Northern印跡法是一種從樣本中檢測特定RNA序列或mRNA序列以研究基因表達的方法。這項技術是由Alwine、Kemp和Stark於1979年開發的。它不同於南方和西方的印跡技術，由於幾個步驟。然而，這種技術也可以通過凝膠電泳、印跡、與特定標記探針雜交和檢測來實現。Northern印跡技術如下。
- 從樣品中提取RNA，用凝膠電泳分離。
- RNA從凝膠轉移到一個吸墨膜上並固定。
- 用從cDNA或RNA製備的標記探針（探針與樣本中的特定序列互補）處理膜。
- 探針與膜一起孵育，與特定序列結合。
- 未綁定的探針被沖洗掉。
- 雜交片段由放射自顯影檢測。
Northern雜交是檢測和定量雜交mRNA、研究RNA降解、評價RNA半衰期、檢測RNA剪接、研究基因表達等方面的重要工具。
圖02：北方印跡法
什麼是免疫印跡法(western blotting)？
免疫印跡法是一種利用標記抗體從蛋白質混合物中檢測特定蛋白質的方法。因此，western blot也稱為免疫印跡。這項技術由Towbin等人於1979年引入，現在已在實驗室進行常規蛋白質分析。步驟如下。
- 從樣本中提取蛋白質
- 蛋白質通過聚丙烯酰胺凝膠電泳按其大小進行分離
- 通過電穿孔將分離的分子轉移到PVDF膜或硝化纖維膜上
- 由於與抗體非特**結合，膜被阻斷
- 轉移的蛋白質與一級抗體（酶標抗體）結合。
- 清洗膜以去除非特**結合的初級抗體
- 結合抗體是通過添加底物和檢測所形成的有色沉澱物來檢測的
Western印跡法用於檢測人血清樣本中的抗HIV抗體。westernblot還可作為乙型肝炎感染的確證試驗和瘋牛病的確診試驗。
圖03：免疫印跡法
南北(northern southern)和免疫印跡法(western blotting)的區別
| 北方vs南方vs西方印跡法 | |
| 檢測到的分子類型 | |
| 北方印跡法 | Northern雜交從RNA樣本中檢測出一個特定的RNA序列。 |
| 南方印跡法 | Southern雜交檢測DNA樣本中的特定DNA序列。 |
| 免疫印跡法 | Western blotting從蛋白質樣本中檢測出一種特定的蛋白質。 |
| 凝膠類型 | |
| 北方印跡法 | 使用瓊脂糖/甲醛凝膠。 |
| 南方印跡法 | 這是用瓊脂糖凝膠。 |
| 免疫印跡法 | 這是用聚丙烯酰胺凝膠。 |
| 印跡法 | |
| 北方印跡法 | 這是毛細管轉移。 |
| 南方印跡法 | 這是毛細管轉移。 |
| 免疫印跡法 | 這是一個電力轉移。 |
| 使用的探頭 | |
| 北方印跡法 | 標記放射性或非放射性的cDNA或RNA探針。 |
| 南方印跡法 | DNA探針被標記為放射性或非放射性。 |
| 免疫印跡法 | 一級抗體用作探針。 |
| 探測系統 | |
| 北方印跡法 | 這是使用自動射線照相術，或檢測光或顏色變化。 |
| 南方印跡法 | 這是通過使用自動射線照相術，檢測光線或顏色變化來完成的。 |
| 免疫印跡法 | 這是通過檢測光線或顏色變化來完成的。 |
總結 - 北方的(northern) vs. 南方的(southern)
印跡法是一種從樣品中鑑定特定DNA、RNA或蛋白質的特殊技術。有三個獨立的印跡程序，即北方，南方和西部，以檢測特定類型的分子。Northern印跡技術是一種從RNA混合物中檢測特定RNA序列的技術。Southern印跡技術能夠從DNA樣本中檢測出特定的DNA序列，而western印跡技術則用於從蛋白質混合物中識別特定的蛋白質。
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