あたたかいとコールドトリプシナリゼーションの違い

動物細胞培養では、ホットトリプシンデポリマー化とコールドトリプシンデポリマー化が一般的な方法として使用されています。その名の通り、温トリプシン法と冷トリプシン法の重要な違いは、細胞を分解するためにトリプシンを添加する温度によって決まります。ホットトリプシン化は高温条件（36.5～37℃）で行い、コールドトリプシン化は低温条件...

重要な違い - ホットトリプシン、コールドトリプシン

動物細胞の初代培養には、主に3つの方法が用いられ、成功を収めている。この3つの方法には、機械的細胞分離法、酵素的細胞分解法、一次エクソソーム法が含まれます。細胞の酵素による重合は、タンパク質の分解酵素であるトリプシンによって、細胞の分離につながる。そのため、この工程はトリプシン化と呼ばれています。トリプシン化は、ホットトリプシン化とコールドトリプシン化の2種類の条件で行うことができます。温熱トリプシン法は、36.5～37℃の温度でトリプシンを用いて細胞を処理する方法である。コールドトリプシネーションは、より低温の条件下、好ましくは極低温に保たれた氷の中で行われるトリプシン化処理である。

カタログ

1. 概要と主な相違点 2. 温トリプシンとは 3. 冷トリプシンとは 4. 温トリプシン法と冷トリプシン法の類似点 5. 並べて比較 - 温トリプシン法と冷トリプシン法 6. まとめ

温熱トリプシン化は何ですか？

トリプシンは、細胞を分離し、初代培養細胞を製造するために、細胞成分を分解する。トリプシンはタンパク質を分解する酵素で、トリプシン化に使用する酵素混合物は粗抽出物でも精製物でもかまいません。粗抽出物には他の分解酵素が含まれているため、タンパク質分解や細胞崩壊に効果があると言われています。

温熱トリプシン分解は、酵素分解法の中で最も一般的な方法で、高温で細胞分裂が行われる。トリプシンで処理する前に、目的の組織を小さく切断する。分解作業を簡略化することができます。切り刻んだ組織は、解剖用塩基性培地と呼ばれる特殊な培地で洗浄される。

洗浄工程終了後、活性酵素（トリプシン）の入ったフラスコに細胞を移し替える。この手法は温トリプシン法を意味するため、トリプシンを37℃前後の温度で約4時間置く。

温暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的区别

図01：トリプシン

内容物を遠心分離方式で混合・攪拌することで、プロトコルを簡略化し、崩壊のスピードを速めることができます。推奨時間に達したら、上清から細胞を抽出することができます。上澄みから抽出された細胞は、特定の温度と時間で培養される。

コールドトリプシナリゼーションは何ですか？

低温トリプシノリシスも低温で起こるトリプシノリシスの一種である。この手法では、刻んで洗浄した細胞を氷上のバイアルに入れ、トリプシンに浸す。浸漬時間はもっと長く、6時間から24時間程度です。

浸漬操作終了後、細胞溶解液からトリプシンを除去し、さらに組織ブロックを37℃で20～30分インキュベートする。細胞の解体は、組織混合物の吸引を繰り返すことで実現します。これにより、細胞は膜から上澄み液に分離されます。上澄み液に入った細胞は、目的の温度と時間で培養・増殖させる。

コールドトリプシン法にはいくつかの利点があります。

細胞へのダメージが少なく、遠心分離のステップを使用せずに生細胞の収量を上げることができます。
とても便利な方法です。
それほど難しくない。

コールドトリプシン法の主な制限は、一度に大量に使用できないことである。

あたたかいとコールドトリプシナリゼーションの共通点

ホットトリプシンもコールドトリプシンも、トリプシンを使って細胞を分解する。
細胞培養時の細胞破壊には、ホットトリプシン処理とコールドトリプシン処理の両方が使用されます。
温冷トリプシン処理時に、上清から細胞を導出する。