温暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的区别

关键区别-热胰蛋白酶和冷胰蛋白酶

在动物细胞培养中，热胰蛋白酶解聚和冷胰蛋白酶解聚是两种常用的方法。顾名思义，温热胰蛋白酶和冷胰蛋白酶之间的关键区别取决于添加胰蛋白酶进行细胞分解的温度。在较高温度条件下（36.5–37℃）进行热胰蛋白酶化，而在低温条件下进行冷胰蛋白酶化。

在动物细胞原代培养过程中，主要采用了三种方法，并已被证明是成功的。这三种方法包括机械分离细胞、酶解细胞和原代外植体技术。细胞的酶解聚合导致细胞分离，它是由蛋白质降解酶胰蛋白酶完成的。因此，这个过程被称为胰蛋白酶化。胰蛋白酶解可在两种不同的条件下进行，即热胰蛋白酶化和冷胰蛋白酶化。温热胰蛋白酶法是在36.5–37℃的温度下用胰蛋白酶处理细胞的方法。冷胰蛋白酶处理是在较冷的条件下进行的胰蛋白酶处理过程，最好是在保持极低温度的冰中进行。

什么是温胰蛋白酶(warm trypsinization)？

胰蛋白酶化可以分解细胞成分，以分离细胞，产生原代细胞培养物。胰蛋白酶是一种蛋白质降解酶，用于胰蛋白酶化的酶混合物可以是粗提取物，也可以是纯化产品。粗提物据说在蛋白质分解和细胞解体方面更有效，因为它含有其他降解酶。

温胰蛋白酶解是最常用的酶解方法，在较高的温度条件下发生细胞分裂。在用胰蛋白酶处理之前，需要的组织被切成小块。它有助于简化分解过程。切碎的组织然后在一种被称为解剖基础盐培养基的特殊介质中清洗。

洗涤步骤完成后，将细胞转化为含有活性酶（胰蛋白酶）的烧瓶。由于这项技术意味着一个温暖的胰蛋白酶程序，胰蛋白酶放置在37℃左右的温度下大约4小时。

温暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的区别

图01：胰蛋白酶

使用离心方法混合和搅拌内容物，以简化协议并加快分解过程。一旦达到建议的时间，细胞就可以从上清液中提取出来。从上清液中提取的细胞然后在特定的温度和时间下培养。

什么是冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)？

冷胰蛋白酶解是在低温条件下发生的另一种胰蛋白酶化。在这项技术中，被切碎和清洗的细胞被放在冰上的小瓶里，然后用胰蛋白酶浸泡。浸泡的时间要长得多，大约6到24小时。

浸泡程序完成后，从细胞裂解液中除去胰蛋白酶，然后将组织块进一步在37℃下培养20-30分钟。细胞的分解是通过反复吸取组织混合物来实现的。这将使细胞从膜上分离出来，进入上清液。一旦细胞进入上清液中，它们就在所需的温度和时间段进行培养和生长。

冷胰蛋白酶法有几个优点

细胞损伤最小化，活细胞产量更高。不使用离心步骤可使细胞损伤最小化。
非常方便的方法。
不那么辛苦。

冷胰蛋白酶法的主要局限性是一次不能大量使用。

温暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的共同点

无论是热胰蛋白酶还是冷胰蛋白酶都使用胰蛋白酶来分解细胞。
在细胞培养过程中，热胰蛋白酶和冷胰蛋白酶处理都用于细胞的分解。
在温热和冷胰蛋白酶处理过程中，细胞来自上清液。

温暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的区别

温热胰蛋白酶法与冷胰蛋白酶法
温胰蛋白酶法是在36.5–37 0的温度下用胰蛋白酶处理细胞的方法。	冷胰蛋白酶化是胰蛋白酶处理的过程，在较冷的条件下进行，最好是在保持极低温度的冰中进行。
协议
切碎的纸巾片在整个过程中持续保持在37摄氏度。	切碎的纸巾最初保持在冰冷的温度下，然后保持在37度。
温度
在36.5–37.0之间发生热胰蛋白酶化	冷胰蛋白酶化发生在冰冷的温度下。
消耗的时间
整个温热胰蛋白酶消化过程所需的时间较少（约4小时）。	冷胰蛋白酶化需要更长的时间（大约6-24小时）。
活细胞产量
热胰蛋白酶化率低。	高低温胰蛋白酶。
离心法的使用
在温热胰蛋白酶解聚时需要离心。	冷胰蛋白酶解不需要离心。
胰蛋白酶化初始组织量
大量组织可用于温热胰蛋白酶化。	少量组织可用于冷胰蛋白酶化。
细胞损伤
由于在温热胰蛋白酶消化中离心分离而高。	由于冷胰蛋白酶化而减少。

总结 - 温暖的(warm) vs. 冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)

胰蛋白酶化是指在细胞培养过程中，利用蛋白质降解酶胰蛋白酶分解和制备原代细胞培养物的方法。根据手术过程中使用的温度，有两种主要的胰蛋白酶化技术。它们是冷热胰蛋白酶。热胰蛋白酶解在37℃下进行，而冷胰蛋白酶化在冰冷的条件下进行。虽然冷胰蛋白酶化需要更长的时间来完成，但据说它有更高的活细胞产量。这是因为在冷胰蛋白酶法中细胞损伤最小化，因为它不使用剧烈的离心步骤。这就是热胰蛋白酶和冷胰蛋白酶的区别。