ブラッドフォード法とローリー法の大きな違いは、ブラッドフォード法が色素Komas Brilliant Blue G-250の吸光度の変化を利用するのに対し、ローリー法はペプチド結合の酸化により生じた銅イオン（Cu+）とFolin-Ciocalteu試薬の反応によるものである点である。

分析とは、試料の主な機能成分を把握するための分析技術である。そのため、アッセイには定性試験と定量試験がある。このアッセイは、実験医学、薬学、環境生物学、分子生物学、生化学、免疫学など多くの分野で頻繁に使用されています。Bradford および Lowry protein assay は、試料溶液中のタンパク質の濃度を測定するための2つの生化学的アッセイです。どちらのアッセイも、結果を得るために比色法を使用しています。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. Bradford protein assay とは 3. Lowry protein assay とは 4. Bradford 法と Lowry 法の類似点 5. 並べて比較 - Bradford と Lowry protein assay の表フォーム 6. まとめ

ブラッドフォードタンパク質アッセイは何ですか？

ブラッドフォード法は、タンパク質の分光分析の迅速な方法である。1976年にマリオン・ブラッドフォードがこの方法を発表しました。この分析では、測定対象であるタンパク質のアミノ酸組成に基づいて全反応が行われる。つまり、ブラッドフォード・プロテイン・アッセイは比色法なのである。染料には「KOMAS Brilliant Blue」を使用しています。したがって、この比色タンパク質アッセイは、色素の吸光度の変化に依存している。Kaumas Brilliant Blue G-250は、カチオン（赤）、アニオン（青）、ニュートラル（緑）の3つの形態があります。酸性条件下では、赤色の色素が青色に変換される。タンパク質の結合を確認することができます。タンパク質が存在しない場合、溶液は褐色のままであることがあります。

図01：ブラッドフォード蛋白質分析

Bradford Protein Assayは、他のプロテインアッセイと異なり、タンパク質溶液中の様々な化合物による干渉を受けにくいのが特徴です。これらの化合物には、ナトリウム、カリウム、グルコース、スクロースなどが含まれます。

ローリープロテインアッセイは何ですか？

Lowry Protein Assayは、溶液中のタンパク質の総量を測定するために使用される生化学的アッセイです。この試薬を1940年に発明したのがオリバー・ローリーである。この方法は、溶液中のタンパク質濃度に比例した色の変化により、溶液中の総タンパク質濃度を説明するものである。したがって、比色タンパク質アッセイでもある。

ペプチド結合の酸化によって生じた銅イオン（Cu+）とFolin-Ciocalteu試薬の反応が基本である。この試薬には、リンモリブデン酸、リンタングステン酸も含まれています。しかし、Lowryタンパク質の解析のための反応機構は不明である。しかし、システイン、トリプトファン、チロシン残基の酸化を伴います。

図02：ローリータンパク解析

システイン残基は、ローリータンパク質分析で観察される吸光度に寄与し、この反応により明るい青色の分子、ヘテロポリモリブデンブルーが生成されます。この分子の還元度を660 nmの吸光度で測定した。したがって、Folin-Ciocalteu試薬のシステイン残基とトリプトファン残基の濃度を下げることで、溶液中のタンパク質の総濃度を推算することができるのである。

ブラッドフォードとローリープロテインアッセイの共通点

• BradfordおよびLowryタンパク質分析は、溶液中のタンパク質の濃度を測定します。
• いずれの方法も比色法である。
• しかも、どちらの手法も感度が高い。

ブラッドフォードとローリープロテインアッセイの違い

ブラッドフォード法とローリー法は、溶液中のタンパク質の濃度を測定する分析法で、ブラッドフォード法はKaumas Brilliant Blue G-250という色素の吸光度の変化を利用し、ローリー法はFolin-Ciocalteu試薬と反応してペプチド結合が酸化され銅イオンが生成することを利用するもので、いずれも溶液中のタンパク質の濃度を測定します。の反応です。Bradford法では15分で結果が出るのに対し、Lowery法では40～60分で結果が出ます。したがって、この点もブラッドフォードとローリーのタンパク質分析の違いと言えるでしょう。また、ブラッドフォードタンパク質分析はアミノ酸組成に依存するが、ローリータンパク質分析はアミノ酸組成に部分的に依存する。したがって、この点もブラッドフォード法とローリー法によるタンパク質分析の違いです。

Bradford分析とLowry分析の違いについては、以下のインフォラフィックで詳しく説明しています。

概要 - ブラッドフォード vs. ローリープロテインアッセイ

ブラッドフォード法、ローリー法ともに、溶液中のタンパク質の濃度を測定するものであり、比色法の下で行われるタンパク質分析法です。Bradford法ではKormas Brilliant Blue G-250を使用し、Lowry法では銅イオン（Cu+）とFolin-Ciocalteu試薬を使っています。また、ブラッドフォード法は、ローリータンパク質分析よりも迅速に結果を得ることができます。しかし、どちらの方法も感度の高い方法であるため、さまざまな物質による干渉を受ける可能性がある。

引用

1 Canadian Journal of Botany.Canadian Journal of Botany - 60(7): 1046-PDF, こちらからご覧いただけます。"Protein Analytical Chemistry", Thermo Fisher Scientific, USA, available here. 2 "Protein Analytical Chemistry", Thermo Fisher Scientific, USA, available here.