電気泳動（sdsページ）とイムノブロット（ウェスタンブロット）法の違い
電気泳動（sdsページ）とイムノブロット（ウェスタンブロット）法の違い
プロテインブロッティングは、タンパク質試料から特定のタンパク質を検出する技術です。この技術は、ゲル電気泳動、ブロッティング、ハイブリダイゼーションといういくつかの重要なステップを経て達成される。ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（SDS-Page）は、タンパク質をそのサイズ（分子量）に基づいて分離するゲル電気泳動技術です。ウエスタンブロットは、SDS-Pageと同じパターンのタンパク質を送達するために用いられる特殊ブロッティング膜です。SDS-Pageとウエスタンブロットの主な違いは、SDS-Pageの場合、タンパク質のサイズ（分子量）が小さいほど、タンパク質の分離が容易になることです。ページが混合物中のタンパク質を分離するのに対し、ウェスタンブロットは混合物中の特定のタンパク質を検出し、定量するものである。どちらの方法も、タンパク質の解析研究に有効です。
目次1.概要と主な違い2.SDSとはP.3.ウェスタンブロットとは4.比較 - SDS-Pageとウェスタンブロット-5.まとめ
電気泳動（sdsページ）は何ですか？
SDS-Pageは、タンパク質を分離するためのゲル電気泳動法である。生化学、遺伝学、法医学、分子生物学などで広く利用されています。タンパク質が試料から抽出されると、タンパク質（変性タンパク質）を直鎖化し、直鎖化したタンパク質に分子量に比例した負の電荷を与えるために用いられる陰イオン性洗剤であるSDSからなるゲル上で分析が行われる。ポリアクリルアミドがゲルの固体担体となる。負に帯電した変性タンパク質は、ゲル内を装置の正極側に移動します。タンパク質の大きさによって、タンパク質間の分離は異なる移動速度で起こる。そのため、SDS-pageは個々のタンパク質をその大きさに応じて分離するのに役立つ。
タンパク質を分類するためのポリアクリルアミドゲルの調製は、SDS-Pageの重要なステップである。ポリアクリルアミドの適切な濃度と架橋剤の種類は、ゲルの物性に大きな影響を与え、異なるタンパク質の実用的な分離を可能にする。効果的な分離を行うためには、ゲルの細孔径を適切に制御する必要があります。しかし、SDS-Pageはタンパク質分離の高分解能技術であると考えられている。
SDS-Page法は、タンパク質分析において大きな制約がある。SDSは分離前にタンパク質を変性させるため、酵素活性、タンパク質結合相互作用、タンパク質補因子などを検出することはできません。
図01：SDS-Page
イムノブロット（ウェスタンブロット）法は何ですか？
ウェスタンブロッティング法は、タンパク質混合物から特定のタンパク質を検出し、タンパク質の量や分子量を測定することができる技術です。プロテインブロットは、SDS-ポリアクリルアミドゲル中のタンパク質の鏡像を得るために使用される膜である。ウェスタンブロッティングに使用される膜は、主にニトロセルロースやポリビニリデン・ジフルオリド（PVDF）で構成されています。転移タンパク質を含む膜を使用することで、目的のタンパク質を同定することができます。ハイブリダイゼーションにより目的のタンパク質を検出するためには、高品質の抗体が必要です。抗体はその特異的な**抗原に結合し、目的の抗原（タンパク質）の存在を示す。
SDSポリアクリルアミドゲルからウェスタンブロットへのタンパク質の転写は、エレクトロブロッティングによって行われる。ゲルからタンパク質を電気泳動し、ニトロセルロース膜に転写する方法（ウェスタンブロット）を、高速かつ効率的に行うことができます。
図02：イムノブロット
電気泳動（sdsページ）とイムノブロット（ウェスタンブロット）法の違い
| SDS-Pageとウェスタンブロッティング | |
| SDS-Pageは、ゲル電気泳動法の一つです。 | ウェスタンブロットとは、膜上のタンパク質の混合物を検出する技術です。 |
| 使用方法 | |
| SDS-pageは、タンパク質をそのサイズに応じて分離することができます。 | ウエスタンブロットは、タンパク質をSDS-pageゲル上にパターンを変えずに転写し、特異抗体とのハイブリダイゼーションを可能にする。 |
| デメリット | |
| タンパク質の変性、高コスト、神経毒性のある化学物質の存在がこの技術の欠点である。 | この手法は非常に時間がかかり、経験豊富な人材と特定の制御条件を必要とします。 |
概要 - 電気泳動（sdsページ） vs. イムノブロット（ウェスタンブロット）法
SDS-pageは分子量に応じてゲル上でタンパク質を簡単に分離することができます。Westernblotは特定の**抗体を用いてハイブリダイゼーションすることにより、特定のタンパク質の存在と量を確認することができます。これが、SDS-Pageとwesternblotの違いです。
R 参考文献：1.Blancher, C. and A. Jones.Methods in Molecular Medicine. u. U.S. National Library of Medicine, n.d. Web. 27 March 2017.ノワコウスキー、アンドリュー・B、ウィリアム・J・ウォービー、デビッド・H・ペトリン。Natural SDS-PAGE: High-resolution electrophoretic separation of proteins retaining intrinsic properties including bound metalions〉、Metallomics: Integrated Biometallic Sciences.u, U.S. National Library of Medicine, May 2014.より引用。Web. 2017年3月27日
- 2020-10-26 20:44 に公開
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- 分類：科学
