如何计算转染效率(calculate transfection efficiency)
转染效率可以通过计算特定样本中转染细胞总数来计算。细胞的数量可以用两种方法来计算。最常用的方法是使用易于处理的记者。这些报告物可以是绿色荧光蛋白（GFP）、荧光素酶、β-半乳糖苷酶、分泌型碱性磷酸酶（SEAP）。最新的计算转染效率的方法是标记核酸，从而跟踪它们在细胞内的传递。其他一些方法如westernblotting、免疫染色和功能分析也可以用来计算转染效率。由于转染效率取决于多个实验参数，因此转染效率的测定是确定各种因素对转染影响的关键。
覆盖的关键领域
1.计算转染效率的方法-报告系统2.如何计算转染效率-细胞计数
关键词：流式细胞术、GFP、核酸标记、报告系统、转染效率
什么是计算转染效率的方法(the methods used to calculate transfection efficiency)？
不同类型的方法用于计算转染效率。
1.报告系统
–绿色荧光蛋白（GFP）–绿色荧光蛋白天然存在于水母中。通过同时转染GFP基因和目的基因，可对转染细胞进行定性和定量分析。定性分析可以在荧光显微镜下进行。流式细胞仪可进行定量分析。除GFP外，红色荧光蛋白（RFP）和黄色荧光蛋白（YFP）也可以作为报告蛋白。E。表达荧光蛋白的大肠杆菌菌落如图1所示。
Figure 1: Fluorescent Proteins
- 荧光素酶-荧光素酶是天然存在于萤火虫，产生光。荧光素酶检测灵敏度高，可用于转染DNA的定量分析。
- β-半乳糖苷酶-β-半乳糖苷酶存在于大肠杆菌中。大肠杆菌。用于X-gal的定性分析和比色法、荧光法或化学发光法的定量分析。
- 分泌型碱性磷酸酶（SEAP）–SEAP是一种热稳定的报告蛋白，在表达时由哺乳动物细胞分泌。
2.核酸标记-荧光标记质粒可用于转染。然后在荧光显微镜下计数。
3.蛋白质印迹、免疫染色和其他功能分析
如何计算转染效率
可以在显微镜下或流式细胞仪上计数显示报告者的细胞数和不显示报告者的细胞数。显示报告基因的细胞的百分比给出了转染效率。
Figure 2: Transfection Efficiency
结论
转染效率可以通过测定样本中显示转染DNA的细胞数与细胞总数的比值来计算。细胞的数量可以在显微镜下或通过流式细胞仪使用报告系统来计算。
引用
- 发表于 2021-06-30 14:07
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- 分类：科学
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