内孢子的染色采用差异染色法。孔雀石绿是一种主要的染色剂，它能染色样品中的营养细胞和内生孢子。然后，使用热有助于渗透到内孢子的主要染色。脱色后，用反染藏红染色背景。

两种致病属，称为芽孢杆菌和梭菌，它们产生代谢不活跃的内孢子，以抵抗恶劣环境条件。由于内孢子引起了许多致死性疾病，因此在临床标本中对其进行鉴定是非常重要的。

覆盖的关键领域

1.什么是内生孢子-定义，事实2.什么是内生孢子染色-内生孢子染色技术3.内生孢子染色为什么要用热-用热

关键词：内生孢子，热，孔雀绿，气孔，营养细胞

什么是内孢子(endospores)？

内生孢子是一些病原菌属如芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌为了在不利的环境条件下生存而产生的一种抗性结构。这些不利条件可能是热、干燥、辐射或化学物质。营养细胞产生内生孢子的过程称为孢子形成。完成这个过程可能需要8-10个小时。内生孢子可以驻留在细菌细胞内，也可以作为游离孢子存在。内生孢子的形成如图1所示。

Figure 1: Endospore Formation

内生孢子代谢不活跃或休眠。它们含有少量的细胞质和被保护性外壳覆盖的DNA。细胞壁由二硅斜酸组成，赋予内孢子耐热性。当环境条件变好时，内生孢子萌发产生新的生物。121℃湿热处理°15分钟可破坏细菌内孢子。

什么是内孢子染色(endospore staining)？

孢子内染色是一种不同的染色过程，即标本的不同结构被染色成不同的颜色。它允许从营养细胞中鉴定内生孢子。标准的内孢子染色方法是Schaeffer-Dulton技术。这项技术的主要染色是孔雀绿，副染色是藏红。

schaeffer-dulton技术-程序

1.在显微镜载玻片上涂抹后，让细菌样品用孔雀石绿溶液饱和。然后，轻轻加热载玻片3-5分钟，直到染料开始蒸发。冷却载玻片，用水冲洗脱色。最后，复染后，冲洗载玻片。风干载玻片并在显微镜下观察。

内生孢子被孔雀绿染成绿色，营养细胞被藏红染成粉红色。用Schaeffer-Dulton技术染色的内生孢子如图2所示。

Figure 2: Endospores (green) and Vgetative Cells (pink)

内孢子染色的另一种技术可以被称为Doner法。在这种方法中内生孢子将被染成红色。

内孢子染色为什么要加热

内孢子的角蛋白覆盖层不易染色。因此，初级染色剂必须进入内孢子。热的使用是为了加强初级染色剂对内孢子的渗透。含有孔雀石绿的载玻片可加热3-5分钟。加热时间与渗入内孢子壁的染料量成正比。较长的加热时间使孢子内壁产生气孔，有利于更多染料的渗透。

结论

内孢子是大多数病原菌的生殖细胞。因此，鉴定样本中的内生孢子是诊断的关键。

引用

1.“内孢子染色-了解定义、技术和程序。” 显微镜大师，这里有。