dna(dna)和rna提取(rna extraction)的区别

DNA提取和RNA提取的主要区别是DNA提取的pH值为8,RNA提取的pH值为4.7。在酸性条件下,DNA易变性并向有机相迁移。在碱性条件下,由于核糖糖中存在2′OH,RNA发生碱性水解。...

DNA提取和RNA提取的主要区别是DNA提取的pH值为8,RNA提取的pH值为4.7。在酸性条件下,DNA易变性并向有机相迁移。在碱性条件下,由于核糖糖中存在2′OH,RNA发生碱性水解。

DNA和RNA提取是从组织细胞中分离和纯化核酸的两个过程。这两个程序包括三个步骤。优质的DNA和RNA在分子生物学、生物技术、基因组学和流行病学实验中起着至关重要的作用。

覆盖的关键领域

1.什么是DNA提取-定义,程序2.什么是RNA提取-定义,程序3.DNA和RNA提取的相似之处是什么-共同特征概述4.DNA和RNA提取的区别是什么-主要区别的比较

关键词:细胞裂解,蛋白质变性,DNA提取,pH值,沉淀,RNA提取

dna(dna)和rna提取(rna extraction)的区别

什么是dna提取(dna extraction)?

DNA提取是DNA的分离纯化过程。DNA可以从血液、冷冻组织样本或石蜡组织块中分离出来。DNA提取的三个步骤是细胞裂解、DNA分离和沉淀。在细胞裂解过程中,细胞膜和细胞核膜等细胞膜屏障破裂,以暴露DNA。下一步是从样品中去除膜脂。最后,DNA的沉淀包括蛋白酶去除DNA相关蛋白和RNA酶去除RNA。

Difference Between DNA and RNA Extraction

Figure 1: DNA Extraction Procedure

DNA提取的基本程序

以下是DNA提取的基本方案。

1.用细胞裂解缓冲液裂解细胞膜

2.油脂被洗涤剂和表面活性剂分解

3.添加蛋白酶消化蛋白质

4.添加核糖核酸酶消化RNA

5.通过加入浓缩盐然后离心分离细胞碎片、消化的蛋白质、脂质和RNA

6.用冰镇乙醇或异丙醇沉淀DNA。乙酸钠的离子强度可以用来改善沉淀。沉淀的DNA在最终溶液中呈线状。

Main Difference - DNA and RNA Extraction

Figure 2: Extracted DNA

苯酚-氯仿萃取法也可用于从蛋白质中分离DNA。在这里,苯酚使样品中的蛋白质变性,提取结束时,DNA仍留在水相中。在有机相中,你可以找到变性的蛋白质。另一种提取DNA的方法是微柱纯化法。在这里,DNA与柱的结合依赖于缓冲液的pH值和盐浓度。

什么是rna提取(rna extraction)?

RNA提取是指从样品中提取RNA的过程。传统的RNA提取方法称为硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取法。硫氰酸胍使蛋白质变性。此外,它破坏了水分子的氢键,起到了促潮剂的作用。RNA提取中使用了一种特殊的试剂,称为Tri试剂。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸钠。RNA提取的基本步骤与DNA提取的基本步骤相似。RNA提取的方案如下所述。

1.用冰冷的PBS清洗细胞,以保持细胞的渗透压。

2.吸取细胞,用Tri试剂使样品均匀。

3.加入氯仿,摇匀。

4.离心可产生三层。顶层是水性的,是透明的。中间层或间期含有沉淀的DNA。底层是有机层,粉红色。

5.去除水层,加入异丙醇。离心可能会产生颗粒。

6.用75%乙醇清洗颗粒。风干颗粒。

7.用TE缓冲液或水溶解颗粒。

Difference Between DNA and RNA Extraction_Figure 3

Figure 3: Phenol-Chloroform Extraction of RNA

RNA提取一般在pH值低于7时进行。在碱性pH下,由于核糖糖的2′位存在OH基团,RNA更容易被碱性水解降解。另外,在酸性条件下,RNA倾向于留在水相中。另一方面,DNA在酸性条件下倾向于变性并进入有机相。因此,DNA提取可在pH 8左右进行。DNA由脱氧核糖糖组成,不经历碱性水解。

dna和rna提取的相似性

  • DNA和RNA提取是从生物样品中分离纯化核酸的过程。
  • 这两个步骤都涉及细胞裂解、从碎片和相关蛋白质中纯化核酸以及制备提取物。
  • 对于这两种程序,必须始终保持低温条件。
  • 包括离心分离混合物中的成分。
  • 在这两个过程中都需要灭活核酸酶的活性。
  • 苯酚-氯仿萃取是两种萃取的关键步骤之一。
  • 硫氰酸胍可以用来保护核酸。
  • RNA的沉淀可以用异丙醇完成。
  • 乙酸钠的离子强度用于改善核酸的沉淀。
  • 样品可通过在260 nm处测量OD进行定量。

dna(dna)和rna提取(rna extraction)的区别

定义

DNA提取:DNA的分离纯化过程

RNA提取:从样品中纯化RNA的工艺

提取的核酸类型

DNA提取:DNA

RNA提取:RNA

酸碱度

DNA提取:8点完成

RNA提取:4.7

步骤

DNA提取:打破细胞膜或细胞裂解,去除膜脂,沉淀DNA

RNA提取:细胞裂解,硫氰酸胍苯酚氯仿提取,异丙醇制备

depc处理水的使用

DNA提取:无

RNA提取:所有试剂均用DEPC处理水制备

存储

DNA提取:DNA可预先提取,分批储存

RNA提取:RNA提取是在下游程序之前完成的

长期贮存

DNA提取:At-20°C

RNA提取:At-80°C

结论

DNA的提取是在pH值为8时进行的。DNA在酸性pH值下变性时倾向于移动到有机相。但是,RNA的提取是在低pH值下进行的,以防止碱性水解降解。DNA和RNA提取步骤的基本目的是相似的。DNA和RNA提取的主要区别在于每种提取方法所采用的pH条件。

引用

1、“DNA提取基础”,阿拉斯加生物实验室虚拟教科书,阿拉斯加费尔贝克斯大学阿拉斯加生物研究所, 可在此处找到2。”RNA分离与逆转录协议:培养细胞, 此处提供 2.“RNA分离与逆转录协议:培养细胞”,《abcam》, 

  • 发表于 2021-06-30 16:20
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  • 分类:科学

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