DNA提取和RNA提取的主要区别是DNA提取的pH值为8,RNA提取的pH值为4.7。在酸性条件下,DNA易变性并向有机相迁移。在碱性条件下,由于核糖糖中存在2′OH,RNA发生碱性水解。
DNA和RNA提取是从组织细胞中分离和纯化核酸的两个过程。这两个程序包括三个步骤。优质的DNA和RNA在分子生物学、生物技术、基因组学和流行病学实验中起着至关重要的作用。
1.什么是DNA提取-定义,程序2.什么是RNA提取-定义,程序3.DNA和RNA提取的相似之处是什么-共同特征概述4.DNA和RNA提取的区别是什么-主要区别的比较
关键词:细胞裂解,蛋白质变性,DNA提取,pH值,沉淀,RNA提取
DNA提取是DNA的分离纯化过程。DNA可以从血液、冷冻组织样本或石蜡组织块中分离出来。DNA提取的三个步骤是细胞裂解、DNA分离和沉淀。在细胞裂解过程中,细胞膜和细胞核膜等细胞膜屏障破裂,以暴露DNA。下一步是从样品中去除膜脂。最后,DNA的沉淀包括蛋白酶去除DNA相关蛋白和RNA酶去除RNA。
Figure 1: DNA Extraction Procedure
DNA提取的基本程序
以下是DNA提取的基本方案。
1.用细胞裂解缓冲液裂解细胞膜
2.油脂被洗涤剂和表面活性剂分解
3.添加蛋白酶消化蛋白质
4.添加核糖核酸酶消化RNA
5.通过加入浓缩盐然后离心分离细胞碎片、消化的蛋白质、脂质和RNA
6.用冰镇乙醇或异丙醇沉淀DNA。乙酸钠的离子强度可以用来改善沉淀。沉淀的DNA在最终溶液中呈线状。
Figure 2: Extracted DNA
苯酚-氯仿萃取法也可用于从蛋白质中分离DNA。在这里,苯酚使样品中的蛋白质变性,提取结束时,DNA仍留在水相中。在有机相中,你可以找到变性的蛋白质。另一种提取DNA的方法是微柱纯化法。在这里,DNA与柱的结合依赖于缓冲液的pH值和盐浓度。
RNA提取是指从样品中提取RNA的过程。传统的RNA提取方法称为硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取法。硫氰酸胍使蛋白质变性。此外,它破坏了水分子的氢键,起到了促潮剂的作用。RNA提取中使用了一种特殊的试剂,称为Tri试剂。它含有硫氰酸胍、苯酚和乙酸钠。RNA提取的基本步骤与DNA提取的基本步骤相似。RNA提取的方案如下所述。
1.用冰冷的PBS清洗细胞,以保持细胞的渗透压。
2.吸取细胞,用Tri试剂使样品均匀。
3.加入氯仿,摇匀。
4.离心可产生三层。顶层是水性的,是透明的。中间层或间期含有沉淀的DNA。底层是有机层,粉红色。
5.去除水层,加入异丙醇。离心可能会产生颗粒。
6.用75%乙醇清洗颗粒。风干颗粒。
7.用TE缓冲液或水溶解颗粒。
Figure 3: Phenol-Chloroform Extraction of RNA
RNA提取一般在pH值低于7时进行。在碱性pH下,由于核糖糖的2′位存在OH基团,RNA更容易被碱性水解降解。另外,在酸性条件下,RNA倾向于留在水相中。另一方面,DNA在酸性条件下倾向于变性并进入有机相。因此,DNA提取可在pH 8左右进行。DNA由脱氧核糖糖组成,不经历碱性水解。
DNA提取:DNA的分离纯化过程
RNA提取:从样品中纯化RNA的工艺
DNA提取:DNA
RNA提取:RNA
DNA提取:8点完成
RNA提取:4.7
DNA提取:打破细胞膜或细胞裂解,去除膜脂,沉淀DNA
RNA提取:细胞裂解,硫氰酸胍苯酚氯仿提取,异丙醇制备
DNA提取:无
RNA提取:所有试剂均用DEPC处理水制备
DNA提取:DNA可预先提取,分批储存
RNA提取:RNA提取是在下游程序之前完成的
DNA提取:At-20°C
RNA提取:At-80°C
DNA的提取是在pH值为8时进行的。DNA在酸性pH值下变性时倾向于移动到有机相。但是,RNA的提取是在低pH值下进行的,以防止碱性水解降解。DNA和RNA提取步骤的基本目的是相似的。DNA和RNA提取的主要区别在于每种提取方法所采用的pH条件。
1、“DNA提取基础”,阿拉斯加生物实验室虚拟教科书,阿拉斯加费尔贝克斯大学阿拉斯加生物研究所, 可在此处找到2。”RNA分离与逆转录协议:培养细胞, 此处提供 2.“RNA分离与逆转录协议:培养细胞”,《abcam》,
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