分几步制作tae缓冲区

TAE缓冲液是由Tris碱、乙酸和EDTA(Tris醋酸盐EDTA)组成的溶液。在PCR扩增、DNA纯化协议或DNA克隆实验产生的DNA产物分析中,它历来是琼脂糖凝胶电泳最常用的缓冲液。...

TAE缓冲液是由Tris碱、乙酸和EDTA(Tris醋酸盐EDTA)组成的溶液。在PCR扩增、DNA纯化协议或DNA克隆实验产生的DNA产物分析中,它历来是琼脂糖凝胶电泳最常用的缓冲液。

Male laboratory technician doing research

该缓冲剂具有低离子强度和低缓冲容量。它最适合于大(>20千碱基)DNA片段的电泳,需要频繁更换或循环更长(>4小时)的凝胶运行时间。考虑到这一点,您可能需要考虑制作缓冲区的几个批次。

考虑到缓冲区易于制作且步骤可以快速执行,一次制作多个批次应该不会特别耗时或困难。按照以下说明,制作TAE缓冲区只需30分钟。

tae缓冲区需要什么

由于制作TAE缓冲区只需要一组快速简单的指令,因此所需的材料数量并不多。你只需要EDTA(乙二胺四乙酸)二钠盐、三联碱和冰醋酸。

制作缓冲液还需要pH计和校准标准(视情况而定)。你还需要600毫升和1500毫升的烧杯或烧瓶以及量筒。最后,你需要去离子水、搅拌棒和搅拌板。

在以下说明中,公式重量(每个元素的原子质量乘以原子数,然后将每个元素的质量相加)缩写为fw。

制备edta储备溶液

提前准备EDTA溶液。在pH值调整到8.0左右之前,EDTA不会完全进入溶液。对于0.5 M(摩尔浓度或浓度)EDTA的500毫升储备溶液,称取93.05克EDTA二钠盐(FW=372.2)。将其溶解在400毫升去离子水中,并用氢氧化钠(NaOH)调节pH值。将溶液加满至最终体积为500毫升。

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称取242克Tris碱(FW=121.14)并将其溶解在约750毫升去离子水中,制备浓缩(50倍)的TAE储备溶液。小心地添加57.1毫升冰酸和100毫升0.5 M EDTA(pH值8.0)。

之后,将溶液调节至1升的最终体积。该储备溶液可在室温下储存。该缓冲液的pH值未调整,应为8.5左右。

制备tae缓冲液的工作溶液

1x TAE缓冲液的工作溶液是通过在去离子水中简单地将储备溶液稀释50倍而制成的。最终溶质浓度为40 mM(毫摩尔)三醋酸盐和1 mM EDTA。缓冲液现在可用于运行琼脂糖凝胶。

总结

在开始之前,请检查库存,以确保您拥有用于TAE缓冲区的所有上述材料。你的供应人员应该能够告诉你,他们是否有你需要的所有物品的库存。你不想在程序中间错过一些东西。

  • 发表于 2021-09-01 18:58
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  • 分类:数学

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