关键区别–克隆与子克隆
克隆和亚克隆是一种分子生物学过程,它创造出具有相同基因的细胞或生物体,这些细胞或生物体带有感兴趣的DNA或基因。克隆技术是一种将感兴趣的基因或DNA**载体,在宿主细菌中进行复制,并产生与基因结构完全相同的细胞或生物体的技术。亚克隆是一种技术,包括将已**载体的感兴趣基因**二级载体,在宿主细菌内复制,并产生基因相同的细胞或生物体副本。克隆和亚克隆的关键区别在于,在克隆过程中,感兴趣的基因一旦连接到载体上,就继续克隆过程,而在亚克隆中,已克隆的感兴趣基因将从母体载体中分离出来,再次**受体载体中,并继续这个过程。
内容1。概述和主要区别2。什么是结束3。什么是子克隆4。并列比较——克隆与子克隆5。摘要
什么是克隆(cloning)?
克隆是产生基因相同的有机体或细胞的过程。在自然界中,克隆是以无性繁殖的方式进行的。当没有遗传重组或改变时,子细胞接受与母体相同的遗传组成。原核生物和真核生物通过二元分裂、芽接、有丝分裂等方式产生克隆。在分子生物学中,克隆基因或特定的DN**段是研究特定DN**段结构和功能的常用方法。
分子克隆的主要目标是复制数百万个带有感兴趣的DN**段(主要是基因)的基因相同的细胞或生物体。它创造的有机体具有与另一个完全相同的基因拷贝。首先,在分子研究中克隆特定的基因以获得结构和功能信息,并用于DNA测序。此外,对于大规模生产特定蛋白质或产品,克隆技术被广泛应用。
克隆过程
克隆过程的基本步骤如下。
- 感兴趣基因的鉴定和分离。(PCR扩增感兴趣基因)。
- 感兴趣基因的限制性消化(限制性内切酶切割基因)。
- 载体DNA的限制性消化。(载体DNA也使用相同的限制性内切酶切割)。
- 将基因**载体并形成重组分子。
- 将重组载体转化为宿主菌。
- 转化菌的分离和鉴定(质粒载体应包含一个可选择的基因,最常见的是一个抗生素抗性基因来筛选转化菌)。
- 重组基因在宿主内的表达。
什么是亚克隆(subcloning)?
亚克隆是将感兴趣的基因从一个载体转移到另一个载体的过程,以观察基因的表达,从而获得所需的基因功能。该方法涉及两个向量,即父向量和目的向量。克隆的**在子克隆中再次移动到第二个向量中。将基因从第一载体转移到第二载体的目的是获得第一载体不能完成的东西,或者在已经克隆的DN**段中再次分离出一个基因并单独表达。限制性酶在这一过程的开始使用。
亚克隆程序
亚克隆的基本步骤如下。
- 在限制性内切酶的帮助下,分离供体质粒(亲本载体)中感兴趣的DNA。
- 用PCR扩增感兴趣的DNA。
- 用凝胶电泳纯化PCR产物(感兴趣的DNA)。
- 用相同的限制性内切酶打开受体质粒,用于分离母体质粒中感兴趣的DNA。
- 将感兴趣的DNA(基因)连接到受体质粒中以产生亚克隆质粒。
- 将亚克隆载体转化为合格宿主菌。
- 转化细胞的筛选。
- 纯化质粒DNA并用于DNA测序或基因表达以获得所需的产物。
亚克隆是在从克隆的基因组中分离出一个基因的情况下进行的,或者当需要将感兴趣的基因转移到一个有用的质粒中以观察所感兴趣的基因的确切功能时进行的。
克隆(cloning)和亚克隆(subcloning)的区别
克隆与子克隆 | |
克隆是产生基因相同的有机体或细胞的过程。 | 亚克隆是将感兴趣的基因从一个载体转移到另一个载体的过程,以观察基因的表达,从而获得所需的基因功能。 |
过程 | |
将感兴趣的DNA从生物体中分离出来,**载体中一次并进行克隆 | 已经克隆的DNA从第一个载体中分离出来,**第二个载体并进行克隆。 |
通过向量**移动 | |
不会将**物(感兴趣的DNA)从一个载体移动到另一个载体。 | 将**内容从父向量移动到目标向量。 |
总结 - 克隆(cloning) vs. 亚克隆(subcloning)
克隆产生的细胞或有机体的基因或DNA的**感兴趣。它通过分离和**感兴趣的DNA到载体和在宿主细菌中表达。子克隆与克隆有相似的步骤。然而,在亚克隆中,已经克隆的DN**段(感兴趣的基因)***载体并转化为宿主菌。这就是克隆和亚克隆的关键区别。
工具书类
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