直接的(direct)和间接elisa(indirect elisa)的区别

直接ELISA和间接ELISA的主要区别在于,在直接ELISA中,一级抗体直接与检测酶结合,而在间接ELISA中,与一级抗体互补的二级抗体与检测酶结合。这意味着直接ELISA使用一种抗体,而间接ELISA使用两种抗体。...

直接ELISA和间接ELISA的主要区别在于,在直接ELISA中,一级抗体直接与检测酶结合,而在间接ELISA中,与一级抗体互补的二级抗体与检测酶结合。这意味着直接ELISA使用一种抗体,而间接ELISA使用两种抗体。

直接和间接ELISA是ELISA(酶联免疫吸附试验)的两种方法,用于检测培养基中是否存在特**抗原或抗体。

覆盖的关键领域

1.什么是直接ELISA–定义、程序、特征2.什么是间接ELISA–定义、程序、特征3.直接ELISA和间接ELISA的相似之处是什么–共同特征概述4.直接ELISA和间接ELISA的区别是什么–主要区别的比较

关键术语

直接ELISA,检测酶,间接ELISA,一抗,二抗,底物

直接的(direct)和间接elisa(indirect elisa)的区别

什么是直接elisa(direct elisa)?

直接酶联免疫吸附试验是一种酶联免疫吸附试验方法,它允许用酶联一级抗体本身检测抗原。这种酶联免疫吸附试验方法是由Perlmann和Engvall首次开发的。它被认为是ELISA最简单的形式。直接ELISA的步骤如下:

  1. 在板的表面涂上样品;
  2. 用酶结合的一级抗体孵育平板;
  3. 清洗以去除平板上未结合的抗体;
  4. 添加酶促反应所需的底物;
  5. 检测板产生的信号。

在这里,与一级抗体结合的两种主要酶是HRP(辣根过氧化物酶)和碱性磷酸酶。与HRP一起使用的三种底物是OPD(邻苯二胺盐酸盐)、TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)和ABTS(2,2'-叠氮基[3-乙苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐)。与碱性磷酸酶一起使用的底物是PNPP(对硝基苯磷酸酯,二钠盐)。底物上的酶促反应引起介质中的颜色变化,这取决于底物的类型和用于反应的酶。这有助于检测带有目标抗原的样本。

Difference Between Direct and Indirect ELISA_Figure 1

Figure 1: Direct ELISA

直接ELISA法更适合于检测样品中的高分子量抗原量。酶联免疫吸附法的步骤数越少,检测速度越快。然而,由于酶标一级抗体所需的时间和成本,直接酶联免疫吸附试验的应用非常少见。另一方面,它也对靶抗原产生不利影响。

什么是间接elisa(indirect elisa)?

间接ELISA是ELISA的另一种方法,它使用两种抗体进行检测:一抗和二抗。间接ELISA的步骤如下:

  1. 在板的表面涂上样品;
  2. 用一级抗体孵育平板;
  3. 清洗以去除平板上未结合的抗体;
  4. 将平板与与检测酶结合的二级抗体孵育;
  5. 清洗以去除平板上未结合的抗体;
  6. 添加酶促反应所需的底物;
  7. 平板产生信号的检测。图2:间接ELISA

间接ELISA通过两个抗体结合步骤进行。另一方面,二级抗体与检测酶结合。一般来说,有大量的二级抗体与酶结合。在这里,二级抗体主要是多克隆、抗物种抗体。由于酶结合抗体的存在,间接ELISA法在寄生虫、细菌和病毒的免疫学检测中得到了广泛的应用。另一方面,一些二级抗体可以结合到板中的一级抗体上。因此,该方法的灵敏度很高。

直接和间接elisa的相似性

  • 直接ELISA和间接ELISA是将感兴趣的抗原直接附着在平板上的两种ELISA方法。
  • 这两种方法都涉及检测样本中是否存在特定的蛋白质分子。这种蛋白质分子直接附着在平板上。
  • 两种方法均采用96孔板或8孔条形管。这些盘子和管子都是聚苯乙烯做的。96孔板为确定反应的最佳稀释度提供了足够的空间。同时,8孔条带管更适合于精细调整的分析。

直接的(direct)和间接elisa(indirect elisa)的区别

定义

直接Elisa是指一级抗体与检测酶结合的Elisa,间接Elisa是指二级抗体与检测酶结合的Elisa。

使用的抗体数量

直接ELISA使用一种抗体作为一级抗体,而间接ELISA使用两种抗体,一级和二级抗体。这是直接ELISA和间接ELISA的主要区别。

检测酶与

在直接ELISA中检测酶与一级抗体相连,而在间接ELISA中检测酶与二级抗体相连。

信号强度

直接ELISA和间接ELISA的另一个区别是,直接ELISA产生的信号强度较小,而间接ELISA产生的信号由于信号放大而更为强烈。

背景信号

然而,直接ELISA比间接ELISA产生更多的背景信号。

敏感

直接ELISA灵敏度较低,间接ELISA灵敏度较高。这也是直接ELISA和间接ELISA的区别。

交叉反应性

直接和间接ELISA的另一个区别是交叉反应。也就是说,交叉反应在直接ELISA中最小,而在间接ELISA中显著。

时间

此外,直接ELISA由于步骤少而耗时较少,而间接ELISA由于抗体结合步骤加倍而耗时较多。

使用频率

直接ELISA比较少见,间接ELISA比较常见。

结论

直接ELISA仅使用一级抗体检测特**抗原。这意味着在直接ELISA中一级抗体与检测酶结合。但是,间接ELISA使用一级抗体与抗原结合,而酶结合的二级抗体与一级抗体结合。由于酶结合一级抗体的可用性较低,直接ELISA不太常见。直接和间接ELISA的主要区别在于所用抗体的数量。

引用

1. “ELISA的类型。” Bio-Rad,Bio-Rad实验室, 此处提供

  • 发表于 2021-07-01 01:18
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  • 分类:科学

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