直接ELISA和间接ELISA的主要区别在于,在直接ELISA中,一级抗体直接与检测酶结合,而在间接ELISA中,与一级抗体互补的二级抗体与检测酶结合。这意味着直接ELISA使用一种抗体,而间接ELISA使用两种抗体。
直接和间接ELISA是ELISA(酶联免疫吸附试验)的两种方法,用于检测培养基中是否存在特**抗原或抗体。
1.什么是直接ELISA–定义、程序、特征2.什么是间接ELISA–定义、程序、特征3.直接ELISA和间接ELISA的相似之处是什么–共同特征概述4.直接ELISA和间接ELISA的区别是什么–主要区别的比较
直接ELISA,检测酶,间接ELISA,一抗,二抗,底物
直接酶联免疫吸附试验是一种酶联免疫吸附试验方法,它允许用酶联一级抗体本身检测抗原。这种酶联免疫吸附试验方法是由Perlmann和Engvall首次开发的。它被认为是ELISA最简单的形式。直接ELISA的步骤如下:
在这里,与一级抗体结合的两种主要酶是HRP(辣根过氧化物酶)和碱性磷酸酶。与HRP一起使用的三种底物是OPD(邻苯二胺盐酸盐)、TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)和ABTS(2,2'-叠氮基[3-乙苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐)。与碱性磷酸酶一起使用的底物是PNPP(对硝基苯磷酸酯,二钠盐)。底物上的酶促反应引起介质中的颜色变化,这取决于底物的类型和用于反应的酶。这有助于检测带有目标抗原的样本。
Figure 1: Direct ELISA
直接ELISA法更适合于检测样品中的高分子量抗原量。酶联免疫吸附法的步骤数越少,检测速度越快。然而,由于酶标一级抗体所需的时间和成本,直接酶联免疫吸附试验的应用非常少见。另一方面,它也对靶抗原产生不利影响。
间接ELISA是ELISA的另一种方法,它使用两种抗体进行检测:一抗和二抗。间接ELISA的步骤如下:
间接ELISA通过两个抗体结合步骤进行。另一方面,二级抗体与检测酶结合。一般来说,有大量的二级抗体与酶结合。在这里,二级抗体主要是多克隆、抗物种抗体。由于酶结合抗体的存在,间接ELISA法在寄生虫、细菌和病毒的免疫学检测中得到了广泛的应用。另一方面,一些二级抗体可以结合到板中的一级抗体上。因此,该方法的灵敏度很高。
直接Elisa是指一级抗体与检测酶结合的Elisa,间接Elisa是指二级抗体与检测酶结合的Elisa。
直接ELISA使用一种抗体作为一级抗体,而间接ELISA使用两种抗体,一级和二级抗体。这是直接ELISA和间接ELISA的主要区别。
在直接ELISA中检测酶与一级抗体相连,而在间接ELISA中检测酶与二级抗体相连。
直接ELISA和间接ELISA的另一个区别是,直接ELISA产生的信号强度较小,而间接ELISA产生的信号由于信号放大而更为强烈。
然而,直接ELISA比间接ELISA产生更多的背景信号。
直接ELISA灵敏度较低,间接ELISA灵敏度较高。这也是直接ELISA和间接ELISA的区别。
直接和间接ELISA的另一个区别是交叉反应。也就是说,交叉反应在直接ELISA中最小,而在间接ELISA中显著。
此外,直接ELISA由于步骤少而耗时较少,而间接ELISA由于抗体结合步骤加倍而耗时较多。
直接ELISA比较少见,间接ELISA比较常见。
直接ELISA仅使用一级抗体检测特**抗原。这意味着在直接ELISA中一级抗体与检测酶结合。但是,间接ELISA使用一级抗体与抗原结合,而酶结合的二级抗体与一级抗体结合。由于酶结合一级抗体的可用性较低,直接ELISA不太常见。直接和间接ELISA的主要区别在于所用抗体的数量。
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