什么是rna量化？(rna quantification?)
核糖核酸（RNA）定量是确定溶液中RNA平均浓度的一种手段。这种测定可以用各种程序进行，通常分为两类之一：分光光度法或荧光染料定量法。分光光度法依赖于RNA吸收某些波长的紫外光的能力。一些荧光染料，如溴化乙锭，可以与像RNA这样的核酸结合，当它们结合时将发出荧光，从而可以测量出发光程度。
当RNA暴露在紫外线下时，它将选择性地吸收波长为260纳米（nm）和280纳米的这种光。这种方法是在分光光度计中进行的，分光光度计产生波长的紫外线，并测量通过RNA的光线。浓度更大的RNA会吸收更多的光。
这两个波长的组合经常用于RNA的定量，因为这种方法可以让研究人员了解样品是否被其他大分子（如蛋白质）所污染。这些污染物通常会选择性地吸收280纳米的光，但不会吸收260纳米的光。因此，计算两种波长下吸收的光的比率可以确定污染的程度。
使用荧光染料进行RNA定量，其结果不易受某些污染物的影响，并可用于低水平的RNA，这将使分光光度法无法使用。像溴化乙锭这样的染料会与RNA结合，产生的亮度可以直接用荧光光度计测量。如果没有光度计，可以制备已知浓度的RNA溶液，未知样品的发光度可以与这些溶液进行大致比较。发光度和RNA浓度之间的关系是线性的，所以研究人员可以根据发光度快速确定浓度测量。
使用任何一种方法进行RNA定量都很容易受到不同污染物的影响。蛋白质、苯酚和大颗粒物都会使分光光度法的结果不准确。这些污染物不会影响荧光染料RNA的定量，但是这种方法会因为样品中存在脱氧核糖核酸（DNA）而变得不准确。
结合核酸的染料会同时结合DNA和RNA，并表现出类似的亮度，因此确保RNA样品的清洁是很重要的。实现这一目标的通常方法是在加入染料之前向混合样品中加入一种破坏DNA的酶，如DNAse。根据样品中RNA的浓度，以及存在哪些污染物，实验室可以使用这些方法中的任何一种来量化RNA。
- 发表于 2022-02-10 14:11
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- 分类：科学
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