关于免疫印迹和westernblot的区别，immunoblot是westernblot更准确的名称，它是分子生物学和免疫遗传学中用来检测样本**定蛋白质的技术。由于抗体参与了westernblot过程，因此可以更准确地称之为免疫印迹。因此，免疫印迹法和western印迹法在原理、方法学和应用上没有显著差异。

基本上，在westernblot中，蛋白质通过凝胶电泳进行变性和大小分离。随后，分离的蛋白带通过称为印迹的过程转移到载体膜，例如硝化纤维素或聚偏氟乙烯。最终，与荧光、放射性标记或报告酶结合的抗体参与识别膜上的特定蛋白质。

覆盖的关键领域

1.什么是免疫印迹-简介2。免疫印迹的方法是什么？蛋白质的等载量、蛋白质的分离、电泳转移、抗体检测3。免疫印迹在生物化学和临床应用中有哪些应用。什么是Western Blot？简要描述

关键术语

蛋白质检测，免疫印迹，一级抗体，二级抗体，Western印迹

什么是免疫印迹(immunoblot)？

免疫印迹是分子生物学和免疫遗传学中最常用的检测样本**定蛋白质的技术。一般来说，这种技术更具体地称为'免疫印迹'由于使用抗体检测蛋白质。

Figure 1: Immunoblot

此外，瑞士巴塞尔弗里德里希·米舍尔研究所的哈里·托宾实验室开发了这种方法。在这里，免疫印迹的原理包括蛋白质的等载量、蛋白质的分子量分离、蛋白质的电泳转移到合适的膜上以及抗体的探测。

免疫印迹法

蛋白质等载量

通常，在免疫印迹中，每个样本的蛋白质浓度相等是很重要的。基本上，每个样品的三个组成部分是蛋白质提取物、细胞裂解缓冲液和样品缓冲液。在这里，细胞裂解缓冲液对于将蛋白质提取物标准化到所需的蛋白质浓度是重要的。此外，样品缓冲液或Laemmli缓冲液对于免疫印迹样品制备是独特的。它含有在SDS-PAGE中起作用的试剂。此外，它还含有Tris-HCl pH 6.80甘油、SDS、β-巯基乙醇和溴酚蓝。

Tris-HCl pH6.80与不连续缓冲体系结合。此外，甘油增加密度的样品，而加载。除此之外，十二烷基硫酸钠是一种有效的离子洗涤剂，以相等的阴离子质量比包覆变性蛋白质。因此，这掩盖了蛋白质的电荷、大小和形状，使蛋白质的分离成为分子量的函数。同时，β-巯基乙醇减少了二硫键，二硫键在一定程度上保持了蛋白质的形状。此外，溴酚蓝在凝胶电泳期间充当染料前体。

蛋白质分子量分离

在上述步骤之后，SDS-PAGE允许在洗涤剂和不连续缓冲系统的帮助下按分子量分离样品。通常，样品在加载到凝胶上之前进行热变性，确保通过单体分子量进行分离。此外，SDS-PAGE中的洗涤剂为SDS。

Figure 2: SDS-PAGE

此外，不连续缓冲系统包括两个缓冲区；运行缓冲器和电极缓冲器。

电泳转移

通常，多种方法的印迹涉及到蛋白质的电泳转移到不同的膜上。然而，它们的原理是相似的，即带负电荷的样品向阳极迁移。

Figure 3: Electrophoretic Transfer

在这一过程中，硝化纤维素一直是膜的金标准，直到PVDF膜问世。重要的是，相对于前者，这些膜具有更高的蛋白质结合能力。

抗体探针

最后，两种抗体参与了探测和分析。它们是一级和二级抗体。现在，蛋白质在膜上。因此，一级抗体直接结合到膜上蛋白质的特定区域。同时，二级抗体通过一级抗体间接与特定蛋白质结合。重要的是，阻断是一种程序，它在抗体探测之前覆盖膜上的剩余表面积。因此，这减少了背景，消除了误报。阻断缓冲液中含有酪蛋白或牛血清白蛋白（BSA）；它们对样品蛋白的亲和力都很低。此外，两种抗体孵育后的清洗步骤对背景的降低也很重要。

Figure 4: Antibody Probing

此外，二级抗体通常与用于分析的特定组分结合。在这里，该组分可以是放射性同位素、荧光团或更常见的报告酶，例如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）。重要的是，在化学发光法的分析中使用酶允许通过比色分析检测膜上的结合抗体。

Figure 5: Chemiluminescent Detection

最后，通过观察细胞膜上的条带，验证了所用一级抗体中是否存在特**蛋白。

应用

通常，在生物化学中，免疫印迹对于单个蛋白质或蛋白质修饰的定性检测非常重要。同时，对色带的大小和颜色强度进行了半定性分析。因此，免疫印迹技术在鉴定克隆后的蛋白质产量方面具有重要意义。

临床上，免疫印迹在检测血清和尿液中抗HIV抗体方面起着关键作用。通常情况下，在ELISA检测后确认HIV诊断是很重要的，这可能会导致假阳性。对变异克雅氏病、牛海绵状脑病或疯牛病、莱姆病等的检测也有重要意义。

什么是蛋白质印迹(western blot)？

westernblot是免疫印迹的另一个名字，它检测样本中的特定蛋白质。然而，westernblot一词是W。尼尔·伯内特在1981年完成了同名的南方DNA杂交。同时，Southern杂交是由英国生物学家edwinsouthern开发的，用于在膜杂交上检测特定的DNA序列。此外，“Northern blot”是由斯坦福大学的James Alwine、David Kemp和George Stark在1977开发的RNA检测技术，由Gerhard Heinrich贡献。

免疫印迹(immunoblot)和蛋白质印迹(western blot)的区别

• 免疫印迹法与western印迹法无显著性差异。然而，免疫印迹是这项技术更正确的名称，因为它使用抗体来检测样本中的蛋白质。

结论

免疫印迹（Immunoblot）是分子生物学中利用抗体检测样本**定蛋白质的技术。因此，由于抗体的检测目的，更正确的名称是免疫印迹技术。然而，它也被称为“western blot”，以代表相反的技术，即Southern blot，检测blot中的特定DNA序列。关于这个过程，免疫印迹涉及变性蛋白质在凝胶上的大小分离，然后将所得片段转移到膜中。最后，标记抗体与膜上的特定蛋白质结合。因此，基于此，免疫印迹和westernblot在原理、方法学和应用上没有显著差异。

References:

1.加维尼K，帕拉米什瓦兰K。Western Blot（蛋白质免疫印迹）[2019年6月7日更新]。地址：StatPearls[互联网]。金银岛（佛罗里达）：StatPearls出版社；2019年1月-。这里有。