双脱氧测序法(sanger sequencing)和焦测序(pyrosequencing)的区别

Sanger测序和焦磷酸测序的主要区别在于Sanger测序是一种使用双脱氧链终止法的DNA测序方法，而焦磷酸测序是一种基于合成测序原理的DNA测序方法。因此，在Sanger测序中，核苷酸的鉴定是在扩增整个DNA片段后通过毛细管电泳进行的，而在焦磷酸测序中，核苷酸的鉴定是通过合成过程中焦磷酸的释放来完成的。...

Sanger测序和焦磷酸测序的主要区别在于Sanger测序是一种使用双脱氧链终止法的DNA测序方法，而焦磷酸测序是一种基于合成测序原理的DNA测序方法。因此，在Sanger测序中，核苷酸的鉴定是在扩增整个DN**段后通过毛细管电泳进行的，而在焦磷酸测序中，核苷酸的鉴定是通过合成过程中焦磷酸的释放来完成的。

Sanger测序和焦磷酸测序是DNA测序的两种方法；前者是大多数靶点的“金标准”，而后者是传统Sanger测序方法的首选。

覆盖的关键领域

1.什么是Sanger测序-定义、过程、重要性2。什么是焦磷酸测序-定义，过程，重要性3。Sanger测序和焦磷酸测序之间有什么相似之处——共同特征概述4。Sanger测序和焦磷酸测序的区别是什么？关键区别的比较

关键术语

DNA测序，PCR，焦磷酸，焦磷酸测序，Sanger测序，敏感性

什么是双脱氧测序法(sanger sequencing)？

Sanger测序是Fredric Sanger于1977年首次提出的第一代DNA测序方法，而Sanger测序的基础是双脱氧链终止法。

sanger测序-程序

在Sanger测序中，DNA聚合酶负责在体外DNA合成过程中选择性地掺入链终止双脱氧核苷酸（ddNTPs）。因此，双脱氧核苷酸（ddNTPs）通过PCR荧光标记进入扩增子。在这里，ddATP用绿色染料标记；ddGTP用黄色染料标记；用蓝色标记ddCTP，用红色染料标记ddTTP），然后用毛细管电泳分离扩增产物，同时检测荧光标记的核苷酸。

Figure 1: Sanger Sequencing Method

sanger排序-重要性

然而，Sanger测序法有几个局限性，包括不能处理较长的测序输出，较少样本的平行分析，样本制备不能完全自动化，成本较高，测序错误，灵敏度较低（10-20%），不足以检测低水平突变等位基因，尽管有这些限制，它还是许多临床程序中测序的“金标准”。

什么是焦测序(pyrosequencing)？

焦磷酸测序是传统Sanger测序的第一种选择。它是英国皇家理工学院（KTH）开发的一种新一代测序技术。此外，这种方法是基于发光检测焦磷酸（PPi）释放在引物定向DNA聚合酶催化核苷酸掺入。

焦磷酸测序-程序

通常，该方法使用四种酶来准确检测所结合的核苷酸。它们是DNA聚合酶、ATP硫酰化酶、荧光素酶和apyrase。此外，测序引物与单链DNA生物素标记模板杂交。另外，四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）、5'磷酸腺苷（APS）和荧光素是反应混合物中的底物。

Figure 2: Pyrosequencing Method

当聚合级联开始时，由于聚合酶的核苷酸掺入，无机PPi释放。然而，释放的PPi的量与每个循环中结合的核苷酸的量相等。随后，ATP硫酰化酶在APS存在下以定量方式将释放的PPi转化为ATP。产生的ATP驱动荧光素酶介导的荧光素酶转化为氧化荧光素酶。而且，这种反应产生的可见光与ATP的量成比例。然后，可以在560nm波长处检测到该光。

此外，apyrase酶的主要功能是连续降解反应混合物中的ATP和未结合的dNTPs。因此，必须在一定的时间间隔（即65s）内，每次向反应中添加一种新的dntp。已知添加的核苷酸，可以确定模板的序列。

焦磷酸测序-重要性

此外，焦磷酸测序是一种广泛应用的技术，具有高精度、并行处理、易于自动化等优点。此外，它还避免了使用标记引物、标记核苷酸和凝胶电泳。此外，它还适用于确认测序和从头测序。此外，焦磷酸测序的主要重要特征是其测序深度，这允许以高灵敏度检测变体。然而，这项技术的主要缺点是它适合测序多达几百个碱基。

sanger测序和焦磷酸测序的相似性

Sanger测序和焦磷酸测序是DNA测序的两种方法。
他们负责鉴定感兴趣的DN**段的核苷酸序列。
这两种方法都更适合对较小的DN**段进行测序。
但是，它们有自己的应用程序，这取决于它们的排序程序和优点。

双脱氧测序法(sanger sequencing)和焦测序(pyrosequencing)的区别

定义

Sanger测序是指通过选择性引入链终止的双脱氧核苷酸进行DNA测序的方法，焦磷酸测序是基于合成测序原理的DNA测序方法。

排序类型

Sanger测序是第一代测序方法，焦磷酸测序是下一代测序化学，是第二代测序方法。

发明

Frederick Sanger和他的同事在1977年第一个开发了Sanger测序，而På纽约én和他的学生MostafaRonaghi是1996年在斯德哥尔摩皇家理工学院开发焦磷酸测序的第一人。

商业化

应用生物系统公司首次将Sanger测序商业化，而roche454和GS-FLX钛平台则采用焦磷酸测序。

原理

首先，Sanger测序与焦磷酸测序的主要区别在于Sanger测序采用双脱氧链终止法，而焦磷酸测序是基于合成测序原理。

核苷酸的鉴定

在Sanger测序中，核苷酸的鉴定是在扩增整个DN**段后通过毛细管电泳进行的，而在焦磷酸测序中，核苷酸的鉴定是通过合成过程中焦磷酸的释放来完成的。

侦查

此外，Sanger测序涉及荧光的检测，而焦磷酸测序涉及560nm处可见光的检测。

dna片段长度

此外，Sanger测序可以读取多达800到1000个碱基对，而焦磷酸测序可以读取多达300到500个碱基对。

意义

Sanger测序是一个步骤多的复杂过程，而焦磷酸测序是一个步骤少的不太复杂的过程。

敏感

另外，Sanger测序和焦磷酸测序的另一个区别是Sanger测序的灵敏度较低，而焦磷酸测序的灵敏度较高。

结论

Sanger测序是第一代测序方法，是传统的测序方法。此外，它也是许多目标的“金本位”。然而，它使用双脱氧链终止法，然后毛细管电泳。另一方面，焦磷酸测序是Sanger测序的第一种选择，是下一代测序的一种。此外，它具有更高的灵敏度和更少的步骤覆盖。一般采用合成测序法，即在DN**段的合成过程中按原样测定核苷酸。因此，Sanger测序和焦磷酸测序的主要区别在于测序方法及其优点。