马克森吉尔伯特(maxam gilbert)和双脱氧测序法(sanger sequencing)的区别

Maxam-Gilbert测序和Sanger测序的主要区别在于Maxam-Gilbert测序是基于DNA的碱基特异性部分化学修饰和随后在修饰的核苷酸附近的位点切割DNA骨架的DNA测序的化学方法。但是,另一方面,Sanger测序是一种链终止方法,它通过将双脱氧核苷酸结合到DNA序列中来中断DNA序列的延伸。此外,Maxam-Gilbert测序使用了大量的有害化学物质,包括放射性物质和联氨。然而,桑...

Maxam-Gilbert测序和Sanger测序的主要区别在于Maxam-Gilbert测序是基于DNA的碱基特**部分化学修饰和随后在修饰的核苷酸附近的位点切割DNA骨架的DNA测序的化学方法。但是,另一方面,Sanger测序是一种链终止方法,它通过将双脱氧核苷酸结合到DNA序列中来中断DNA序列的延伸。此外,Maxam-Gilbert测序使用了大量的有害化学物质,包括放射性物质和联氨。然而,桑格测序使用较少的危险化学品。

Maxam-Gilbert和Sanger测序是20世纪70年代中期发展起来的两种常规DNA测序方法。一般来说,它们负责确定DNA分子中的核苷酸碱基。

覆盖的关键领域

1.什么是Maxam Gilbert测序-定义、过程、重要性2。什么是Sanger测序-定义、过程、重要性3。Maxam Gilbert和Sanger测序之间有什么相似之处——共同特征概述4。Maxam-Gilbert和Sanger测序的区别是什么-关键区别的比较

关键术语

常规方法,DNA测序,Maxam-Gilbert测序,Sanger测序

马克森吉尔伯特(maxam gilbert)和双脱氧测序法(sanger sequencing)的区别

什么是maxam-gilbert序列(maxam gilbert sequencing)?

Maxam-Gilbert测序是由Allan-Maxam和Walter-Gilbert于1977-1980年开发的两种常规DNA测序方法之一,也被称为DNA测序的化学方法。

概述

基本上,这种方法包括用化学试剂对DNA分子进行末端标记,然后在四种不同的化学反应中对DNA的碱基进行修饰。随后,DNA在修饰的A+G、G、C+T和C碱基的附着点被切割。随后,放射性片段被合成,从标记端延伸到核苷酸碱基的位置。最后,页面将断裂点分开,为DNA的四个碱基中的每一个产生四种不同的裂解模式。

化学

Maxam-Gilbert排序的步骤是:

  1. γ-32P-ATP激酶反应放射性标记5′端及其纯化
  2. 对A+G、G、C+T、C碱的四种化学处理(用甲酸使嘌呤(A+G)脱尿,用*****使鸟嘌呤(G)甲基化,用联氨使嘧啶(C+T)水解,用氯化钠抑制胸腺嘧啶的联氨反应,只水解胞嘧啶(C)
  3. 热哌啶裂解修饰DNA(CH2)5NH在修饰碱基的位置产生一系列从放射性标记端到第一个“切割”位点的标记片段。
  4. 页面上片段的大小分级(聚丙烯酰胺凝胶电泳)。
  5. 通过放射自显影可视化,推断序列。图1:Maxam-Gilbert测序

重要性

基本上,Maxam-Gilbert测序的两个重要特征是它既敏感又特异。因此,它可以很好地区分碱基。不过,分析一个200-300碱基的序列需要几天时间。另一方面,它同时使用放射性元素和联氨,联氨是一种神经毒素。

什么是双脱氧测序法(sanger sequencing)?

Sanger测序是由Frederick Sanger及其同事于1977年开发的第二种常规DNA测序方法。值得注意的是,它已被应用生物系统公司商业化。

概述

一般来说,Sanger测序法也被称为链终止法,它是通过DNA聚合酶在体外复制DNA而引入链终止双脱氧核苷酸(ddNTPs)的方法。值得注意的是,ddNTP缺乏一个3′-OH基团,负责与进入的核苷酸形成磷酸二酯键,导致DNA聚合酶随着修饰的ddNTP的掺入而停止DNA的延伸。此外,这些DDNTP被放射性或荧光标记,允许检测碱基。

化学

Sanger测序的步骤是:

  1. 用ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP将DNA样品分成四个独立的测序反应。
  2. 荧光标记(绿色染料ddATP,蓝色染料ddCTP,黄色染料ddGTP,红色染料ddTTP)
  3. 用相应的ddNTP分别进行PCR反应。在这里,双脱氧核苷酸的浓度应该比相应脱氧核苷酸的浓度低大约100倍。
  4. 变性聚丙烯酰胺-尿素凝胶中扩增子的热变性和分离。四个反应在四个单独车道(车道A、T、G、C)中的一个车道上进行。
  5. DNA序列的可视化和测定。图2:Sanger测序

重要性

值得注意的是,Sanger测序是一种大大简化的DNA测序方法。因此,这种方法的出现促进了DNA测序,使各种基因和生物体的序列数据积累更加迅速。但是,在这个过程中,它不使用很多危险化学品。尽管如此,Sanger测序法的灵敏度相对较低。

maxam-gilbert和sanger测序的相似性

  • Maxam-Gilbert和Sanger测序 是DNA测序的两种常规方法。
  • 而且,它们是第一代的方法 排序。
  • 值得注意的是,与自动测序相比,这两种方法既耗时又麻烦。
  • 此外,他们还可以分析短的DN**段到 500个基地。
  • 然而,这两条DN**段都可以 被排序。
  • 一般来说,他们的原则导致了发展 下一代测序方法。

马克森吉尔伯特(maxam gilbert)和双脱氧测序法(sanger sequencing)的区别

定义

Maxam-Gilbert测序是基于核苷酸特**部分化学修饰和随后的DNA切割的DNA测序方法。相比之下,Sanger测序指的是DNA聚合酶在体外DNA复制过程中选择性掺入链终止双脱氧核苷酸的过程。

编制人

Maxam-Gilbert测序是由Allan Maxam和Walter Gilbert在1977-1980年开发的,而Sanger测序是由Frederick Sanger和同事在1977年开发的。

被称为

Maxam-Gilbert测序是化学测序法,Sanger测序是链终止法。

化学制品

Maxam-Gilbert测序使用大量的危险化学品,包括放射性物质和联氨,而Sanger测序使用的危险化学品较少。

敏感性和特**

Maxam-Gilbert测序具有高度的敏感性和特**,而Sanger测序则不那么敏感和特异。

结论

Maxam-Gilbert测序是两种常用的DNA测序方法之一。通常,它使用各种化学物质对DNA链上的核苷酸碱基进行特殊修饰。最终,DNA在修饰位点的裂解允许碱基的测定。值得注意的是,这种方法更加敏感和具体。但是,它使用危险化学品。相比之下,Sanger测序法是第二种常规的DNA测序方法,得到了广泛的应用。通常,它使用标记的ddNTPs来终止DNA复制过程中四个核苷酸的链增长。最后,在凝胶上分离终止的扩增子可以确定DNA序列。然而,与第一种方法相比,这种方法的特**和灵敏度较低。不过,它使用的危险化学品更少。因此,Maxam-Gilbert和Sanger测序的主要区别在于方法和重要性。

References:

1.“DNA测序”集成DNA技术。这里有。

  • 发表于 2021-07-02 03:44
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  • 分类:科学

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张恬i
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