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DNA提取和RNA提取的主要区别是DNA提取的pH值为8,RNA提取的pH值为4.7。在酸性条件下,DNA易变性并向有机相迁移。在碱性条件下,由于核糖糖中存在2′OH,RNA发生碱性水解。...
分子生物学的中心法则描述了从DNA到RNA到蛋白质的信息流。这种信息流称为基因表达。它主要通过两个过程发生:转录和翻译。转录是包含基因编码序列的RNA分子的合成。翻译是在转录之后进行的,其中一个基因的氨基酸序列是根据mRNA中的编码序列合成的。...
转录的最终产物是RNA分子。因此,在转录过程中,将基因组中的基因信息复制到RNA中。转录产生的RNA主要有mRNA、tRNA和rRNA。此外,转录是蛋白质合成的第一步。在此期间,RNA聚合酶转录基因中的信息,从而产生RNA分子。在蛋白质合成过程中,mRNA将一个基因的信息从细胞核传递到细胞质。另外,另外两种主要的RNA类型有利于翻译。...
螺旋酶是双链DNA解绕产生单链DNA的主要原因。它们负责DNA复制、重组和修复过程中的DNA解绕。双链DNA的解绕始于复制的起源,并继续形成一种称为复制叉的结构。两条DNA链之间氢键的断裂需要ATP形式的能量。螺旋酶还捕获未找到的碱基,以防止DNA的再整理。...
定量或实时PCR是检测不同实验条件下基因表达相对变化的常规方法。QPCR过程中引物和探针的设计是影响检测质量和成功率的关键因素之一。QPCR引物的设计有几个原则:引物GC含量应为35-65%;底漆的熔化温度应在60-68℃°C类;还应避免二级结构,Gs或Cs的重复长度超过3碱基,以及引物二聚体的形成。...
基因治疗是将外源基因物质导入人体细胞,以补偿异常基因或合成有益蛋白质。有效地将遗传物质转移到靶细胞是达到预期治疗效果的关键。为了促进基因转移,可以使用病毒载体或非病毒载体作为传递系统。病毒是一种广泛使用的载体,可以将外源DNA转移到细胞中。基因转移中最常见的病毒载体有逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒。病毒感染细胞的能力是病毒作为基因治疗载体的关键。...
基因组库是包含特定生物体总染色体DNA的两种DNA库之一。在基因组库中,不同的DNA插入物存储在一个相同载体的群体中。为了制备一个特定生物体的基因组库,基因组DNA应该从生物体中分离出来。限制酶在特定的DNA序列中消化基因组DNA,从而产生基因组DNA片段。每个片段可能包含一个或两个基因。这些片段被插入到特定类型的载体中,并转化为宿主细菌,以制备DNA克隆。...
oligo-dT/载体组合主要用于通过亲和层析技术从总RNA中纯化mRNA。从总RNA中分离mRNA的方法主要有两种,一种是根据细胞的类型;即直接法和减法。本文对这两种方法进行了说明。...
westernblotting是一种分子生物学技术,用于检测样本中的特定蛋白质。它使用SDS-PAGE根据蛋白质的大小来分离蛋白质,然后这些分离的蛋白质被转移到膜中。这项技术使用特定的一级抗体在印迹中标记特定的蛋白质。用报告蛋白标记的二级抗体检测用一级抗体标记的蛋白。...
Southern杂交是一种用于检测样本中特定DNA片段的技术。印迹技术涉及通过凝胶电泳根据大小分离DNA片段,将大小分级的DNA样品转移到滤膜上,用标记的序列特异性探针杂交特定的DNA片段,并检测标记的条带。...
质粒图谱是质粒中元素的相对位置。通过了解质粒的特征可以阅读质粒图谱。它们是质粒的名称和大小,质粒的元素,它们的相对位置,以及启动子的方向。复制起源(ORI)、耐药基因、多克隆位点(MCS)、目的基因、启动子区、选择标记和引物结合位点是质粒的组成部分。质粒中元素的相对位置可以通过定位质粒来确定。质粒定位的过程称为限制性定位。...
转染效率可以通过计算特定样本中转染细胞总数来计算。细胞的数量可以用两种方法来计算。最常用的方法是使用易于处理的记者。这些报告物可以是绿色荧光蛋白(GFP)、荧光素酶、β-半乳糖苷酶、分泌型碱性磷酸酶(SEAP)。最新的计算转染效率的方法是标记核酸,从而跟踪它们在细胞内的传递。其他一些方法如westernblotting、免疫染色和功能分析也可以用来计算转染效率。由于转染效率取决于多个实验参数,因此...
测序是测定特定DNA片段核苷酸序列所涉及的过程。测序过程中,用荧光标记核苷酸对DNA片段进行PCR标记。这一过程使用四种荧光标记核苷酸,它们是二氧基核苷酸(ddNTPs)。ddNTPs缺乏一个3′OH基团,其中磷酸群的传入核苷酸是连接。因此,当ddNTP加入生长链时,链的3′端不再添加核苷酸。这意味着在增长链中添加ddNTP终止了链增长。由于ddNTPs以低浓度加入PCR混合物中,因此每个生长链在...
稳定转染是将外源DNA长期导入细胞的过程。稳定转染的细胞通过子代传递外源DNA。因此,要获得稳定转染的细胞系,必须将外源DNA整合到细胞系的基因组中。然而,在非基因组DNA中也可以观察到稳定的遗传。一个成功的、稳定的转染需要有效的DNA递送方法以及在细胞系中对外源DNA的选择方法。稳定转染的细胞系被广泛应用于重组蛋白的生产、基因功能研究、药物发现分析等。...
Illumina测序是下一代测序方法,又称“合成测序法”。Illumina测序涉及并行处理数百万个片段。Illumina测序工作流程涉及的四个基本步骤是库准备、聚类生成、测序和数据分析,本文将对此进行进一步描述。...