限制性内切酶是一类切割DNA分子的酶。每种酶都能识别DNA链中独特的核苷酸序列，通常约有四到六个碱基对长。这些序列是回文的，因为互补的DNA链在相反方向上具有相同的序列。换句话说，两条DNA链在同一位置被切割。

这些酶是在哪里发现的

限制性内切酶存在于许多不同的细菌菌株中，它们的生物学作用是参与细胞防御。这些酶通过破坏细胞来限制进入细胞的外来（病毒）DNA。宿主细胞有一个限制性修饰系统，该系统在其各自限制性内切酶的特定位点使其自身DNA甲基化，从而保护其免受切割。已经发现了800多种已知酶，它们可以识别100多种不同的核苷酸序列。

限制性内切酶的类型

有五种不同类型的限制性内切酶。I型在随机位置切割DNA，从识别位点切割到1000个或更多的碱基对。III型从该位点切割约25个碱基对。这两种类型都需要ATP，可以是具有多个亚单位的大型酶。II型酶主要用于生物技术，在不需要ATP的情况下将DNA切割到公认的序列中，并且更小、更简单。

II型限制性内切酶是根据分离出的细菌种类命名的。例如，EcoRI酶是从E。大肠杆菌。大多数公众都熟悉电子商务。食品中的大肠杆菌爆发。

II型限制性内切酶可以产生两种不同类型的切割，这取决于它们是在识别序列的中心切割两条链，还是在靠近识别序列一端的位置切割每条链。

前一个切口将产生“钝端”，没有核苷酸悬垂。后者产生“粘性”或“内聚性”末端，因为产生的每个DNA片段都有一个突出部分，与其他片段互补。这两种基因在制造重组DNA和蛋白质的分子遗传学中都很有用。这种形式的DNA之所以突出，是因为它是由两条或多条原本没有连接在一起的不同链连接（结合在一起）而产生的。

IV型酶识别甲基化的DNA，V型酶使用RNA切割入侵生物体上的非回文序列。

在生物技术中的应用

生物技术中使用限制性内切酶将DNA切割成更小的链，以研究个体之间的片段长度差异。这被称为限制性片段长度多态性（RFLP）。它们也被用于基因克隆。

RFLP技术已被用于确定个体或个体群体在基因组某些区域的基因序列和限制性切割模式上存在显著差异。对这些独特区域的了解是DNA指纹分析的基础。每种方法都依赖于使用琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。TBE缓冲液由Tris碱、硼酸和EDTA组成，常用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA产物。

用于克隆

克隆通常需要将基因插入质粒中，质粒是一种DNA片段。限制性内切酶可以协助这一过程，因为它们在切割时会留下单链悬垂物。DNA连接酶是一种单独的酶，可以将两个DNA分子连接在一起，并具有匹配的末端。

因此，通过使用限制性内切酶和DNA连接酶，来自不同来源的DNA片段可以用来创建一个单一的DNA分子。