主要區別——sds-page與native-page
SDS和native-page是分子生物學中兩種聚丙烯酰胺凝膠電泳技術。SDS-Page與國產聚丙烯酰胺凝膠的主要區別是所用的聚丙烯酰胺凝膠的種類。SDS-Page中使用變性凝膠,因此分子根據分子量進行分離。相反,在本機頁面中,使用非變性凝膠。因此,分子的大小、電荷和形狀決定了分子的分離。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(Page)使用由丙烯酰胺單體與亞甲基雙丙烯酰胺聚合而成的凝膠。聚丙烯酰胺比瓊脂糖更堅韌,更耐熱。聚丙烯酰胺凝膠的孔徑較小,能夠有效分離蛋白質。有兩種主要的頁面設置類型,即SDS-Page和Native-Page。SDS-Page或十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳根據分子量分離蛋白質。變性凝膠用於SDS-Page。Native-Page使用非變性凝膠,根據大小、電荷和形狀(3D構象)分離蛋白質。
目錄
1. 概述和主要區別
2. 什麼是SDS-Page
3. 什麼是本地頁面
4. SDS-Page與Native-Page的相似性
5. 並列比較——SDS Page與Native Page表格形式
6.摘要
什麼是電泳(sds page)?
SDS-Page是最常用的電泳技術,用於根據分子量分離蛋白質。這種凝膠是通過添加十二烷基硫酸鈉(十二烷基硫酸鈉)製成的。SDS假牙將蛋白質合成單體。十二烷基硫酸鈉是一種陰離子洗滌劑。因此,它在一個很寬的pH範圍內給蛋白質增加了一個淨負電荷。當淨負電荷被賦予蛋白質分子時,由於電荷的變化,複雜的結構被破壞。正電荷吸引負電荷。因此,分子量較低的分子在凝膠基質上的移動速度較快,可以在靠近陽極的地方觀察到,而分子量較高的蛋白質則在離孔較近的地方被觀察到。
SDS與多肽鏈的結合與其相對分子質量成正比。因此,分子量也可以通過SDS-Page測定。SDS-Page凝膠的染色採用溴酚藍染色法。SDS-page的應用範圍更廣,可以用來估計蛋白質混合物中蛋白質的相對分子質量和相對丰度。SDS-Page也可用於測定蛋白質在混合物中的分佈。SDS-Page也可用於蛋白質的純化和鑑定。它被用作western印跡和雜交的初步程序,進而用於蛋白質定位和鑑定。
什麼是本機頁面(native page)?
天然聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native Page)使用非變性凝膠。因此,不向凝膠基質中添加SDS或任何其他變性劑。在天然聚丙烯酰胺凝膠電泳中,蛋白質的分離是基於蛋白質的電荷和大小。因此,蛋白質的流動性取決於蛋白質的電荷和大小。
蛋白質的電荷取決於氨基酸的側鏈。如果側鏈帶負電,蛋白質將受到整體負電荷,反之亦然。由於發生摺疊,蛋白質保持三維構象。摺疊是蛋白質中幾種鍵類型的結果,如二硫鍵、疏水相互作用和氫鍵。因此,如果在中性pH條件下進行天然聚丙烯酰胺凝膠電泳,蛋白質將根據蛋白質的分子形狀進行分離。因此,天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可作為檢測蛋白質電荷或構象變化的敏感技術。
天然聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優點是用於聚丙烯酰胺凝膠電泳分析的蛋白質可以在聚丙烯酰胺凝膠電泳分析後恢復到原來的狀態,因為蛋白質在這個過程中不會受到干擾。天然聚丙烯酰胺凝膠電泳是一種相對高通量的技術,蛋白質的穩定性得到提高。
凝膠運行完成後,可通過溴酚藍或任何其他合適的染色試劑染色來觀察天然聚丙烯酰胺凝膠。天然聚丙烯酰胺凝膠電泳的應用包括分離酸性蛋白(包括糖蛋白,如重組人紅細胞生成素)或鑑定牛血清白蛋白(BSA)中的蛋白質。
電泳(sds page)和本機頁面(native page)的共同點
- SDS-Page和Native-Page均採用聚丙烯酰胺凝膠作為凝膠基質。
- 兩者都用於蛋白質的分離和鑑定。
- 兩者都使用電泳遷移率來分離化合物。
- 這兩種方式都可以以垂直方式或水平方式完成(主要是作為垂直頁面設置完成,因為運行長度更大)。
- 電泳設備包括凝膠槽、梳子和電源,這兩種技術的操作都需要。
- 凝膠的可視化可以通過兩種技術中的染色方法來完成。
電泳(sds page)和本機頁面(native page)的區別
SDS-Page與Native-Page | |
SDS-Page或十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-Page)根據蛋白質分子量分離蛋白質,並使用變性凝膠。 | Native-Page使用非變性凝膠,根據大小、電荷和形狀(3D構象)分離蛋白質。 |
凝膠類型 | |
變性凝膠用於SDS-page。 | 一種非變性凝膠被用於原生頁面。 |
SDS的存在 | |
SDS是一種洗滌劑,在SDS-page中給樣品帶上負電荷。 | SDS在本機頁面中不存在。 |
分離依據 | |
蛋白質的分離取決於SDS-page中蛋白質的分子量。 | 分離取決於蛋白質分子的大小和形狀。 |
蛋白質的穩定性 | |
SDS-page分析表明,該蛋白的穩定性較低。 | 蛋白質的穩定性較高。 |
原蛋白的回收 | |
不可能,因為它在SDS-page中變性。 | 可能在本機頁面上。 |
總結 - 電泳(sds page) vs. 本機頁面(native page)
SDS-Page和Native-Page是兩種用於分離蛋白質的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術。SDS-Page用一種叫做SDS的洗滌劑處理。SDS給蛋白質帶上一個總的負電荷,然後導致蛋白質變性。因此,蛋白質是根據其分子量來分離的。相比之下,原生頁面技術不使用任何變性劑。因此,這些蛋白質要麼是根據它們的大小或形狀來分離的。這就是SDS-page和native-page的區別。
引用
1.“聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)的原理和方法。”聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)的原理和方法| MBL Life Sience-ASIA-。可在此處查閱2.“天然凝膠”。聯盟蛋白質實驗室|生物物理特性鑑定服務。此處提供
2.“天然凝膠”,聯盟蛋白質實驗室|生物物理鑑定服務。