主要区别——sds-page与native-page
SDS和native-page是分子生物学中两种聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。SDS-Page与国产聚丙烯酰胺凝胶的主要区别是所用的聚丙烯酰胺凝胶的种类。SDS-Page中使用变性凝胶,因此分子根据分子量进行分离。相反,在本机页面中,使用非变性凝胶。因此,分子的大小、电荷和形状决定了分子的分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Page)使用由丙烯酰胺单体与亚甲基双丙烯酰胺聚合而成的凝胶。聚丙烯酰胺比琼脂糖更坚韧,更耐热。聚丙烯酰胺凝胶的孔径较小,能够有效分离蛋白质。有两种主要的页面设置类型,即SDS-Page和Native-Page。SDS-Page或十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳根据分子量分离蛋白质。变性凝胶用于SDS-Page。Native-Page使用非变性凝胶,根据大小、电荷和形状(3D构象)分离蛋白质。
目录
1. 概述和主要区别
2. 什么是SDS-Page
3. 什么是本地页面
4. SDS-Page与Native-Page的相似性
5. 并列比较——SDS Page与Native Page表格形式
6.摘要
什么是电泳(sds page)?
SDS-Page是最常用的电泳技术,用于根据分子量分离蛋白质。这种凝胶是通过添加十二烷基硫酸钠(十二烷基硫酸钠)制成的。SDS假牙将蛋白质合成单体。十二烷基硫酸钠是一种阴离子洗涤剂。因此,它在一个很宽的pH范围内给蛋白质增加了一个净负电荷。当净负电荷被赋予蛋白质分子时,由于电荷的变化,复杂的结构被破坏。正电荷吸引负电荷。因此,分子量较低的分子在凝胶基质上的移动速度较快,可以在靠近阳极的地方观察到,而分子量较高的蛋白质则在离孔较近的地方被观察到。
SDS与多肽链的结合与其相对分子质量成正比。因此,分子量也可以通过SDS-Page测定。SDS-Page凝胶的染色采用溴酚蓝染色法。SDS-page的应用范围更广,可以用来估计蛋白质混合物中蛋白质的相对分子质量和相对丰度。SDS-Page也可用于测定蛋白质在混合物中的分布。SDS-Page也可用于蛋白质的纯化和鉴定。它被用作western印迹和杂交的初步程序,进而用于蛋白质定位和鉴定。
什么是本机页面(native page)?
天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native Page)使用非变性凝胶。因此,不向凝胶基质中添加SDS或任何其他变性剂。在天然聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白质的分离是基于蛋白质的电荷和大小。因此,蛋白质的流动性取决于蛋白质的电荷和大小。
蛋白质的电荷取决于氨基酸的侧链。如果侧链带负电,蛋白质将受到整体负电荷,反之亦然。由于发生折叠,蛋白质保持三维构象。折叠是蛋白质中几种键类型的结果,如二硫键、疏水相互作用和氢键。因此,如果在中性pH条件下进行天然聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质将根据蛋白质的分子形状进行分离。因此,天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可作为检测蛋白质电荷或构象变化的敏感技术。
天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点是用于聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的蛋白质可以在聚丙烯酰胺凝胶电泳分析后恢复到原来的状态,因为蛋白质在这个过程中不会受到干扰。天然聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种相对高通量的技术,蛋白质的稳定性得到提高。
凝胶运行完成后,可通过溴酚蓝或任何其他合适的染色试剂染色来观察天然聚丙烯酰胺凝胶。天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用包括分离酸性蛋白(包括糖蛋白,如重组人红细胞生成素)或鉴定牛血清白蛋白(BSA)中的蛋白质。
电泳(sds page)和本机页面(native page)的共同点
- SDS-Page和Native-Page均采用聚丙烯酰胺凝胶作为凝胶基质。
- 两者都用于蛋白质的分离和鉴定。
- 两者都使用电泳迁移率来分离化合物。
- 这两种方式都可以以垂直方式或水平方式完成(主要是作为垂直页面设置完成,因为运行长度更大)。
- 电泳设备包括凝胶槽、梳子和电源,这两种技术的操作都需要。
- 凝胶的可视化可以通过两种技术中的染色方法来完成。
电泳(sds page)和本机页面(native page)的区别
SDS-Page与Native-Page | |
SDS-Page或十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-Page)根据蛋白质分子量分离蛋白质,并使用变性凝胶。 | Native-Page使用非变性凝胶,根据大小、电荷和形状(3D构象)分离蛋白质。 |
凝胶类型 | |
变性凝胶用于SDS-page。 | 一种非变性凝胶被用于原生页面。 |
SDS的存在 | |
SDS是一种洗涤剂,在SDS-page中给样品带上负电荷。 | SDS在本机页面中不存在。 |
分离依据 | |
蛋白质的分离取决于SDS-page中蛋白质的分子量。 | 分离取决于蛋白质分子的大小和形状。 |
蛋白质的稳定性 | |
SDS-page分析表明,该蛋白的稳定性较低。 | 蛋白质的稳定性较高。 |
原蛋白的回收 | |
不可能,因为它在SDS-page中变性。 | 可能在本机页面上。 |
总结 - 电泳(sds page) vs. 本机页面(native page)
SDS-Page和Native-Page是两种用于分离蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。SDS-Page用一种叫做SDS的洗涤剂处理。SDS给蛋白质带上一个总的负电荷,然后导致蛋白质变性。因此,蛋白质是根据其分子量来分离的。相比之下,原生页面技术不使用任何变性剂。因此,这些蛋白质要么是根据它们的大小或形状来分离的。这就是SDS-page和native-page的区别。
引用
1.“聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的原理和方法。”聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的原理和方法| MBL Life Sience-ASIA-。可在此处查阅2.“天然凝胶”。联盟蛋白质实验室|生物物理特性鉴定服务。此处提供
2.“天然凝胶”,联盟蛋白质实验室|生物物理鉴定服务。